SNaPshot方法检测ROS相关基因多态性与VPA造成肝损伤的易感性的研究

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1、分类号：R968单位代码：10183研究生学号：2015344028密级：公开吉林大学硕士学位论文(学历学位)SNaPshot方法检测ROS相关基因多态性与VPA造成肝损伤的易感性的研究ROSrelatedgenespolymorphismsandsusceptibilitytoVPA-inducedliverinjurybySNaPshotassay作者姓名：赵天罡专业：生物工程研究方向：遗传药理学指导教师：郭颖杰教授培养单位：生命科学学院2018年6月SNaPshot方法检测ROS相关基因多态性

2、与VPA造成肝损伤的易感性的研究ROSrelatedgenespolymorphismsandsusceptibilitytoVPA-inducedliverinjurybySNaPshotassay作者姓名：赵天罡专业名称：生物工程指导教师：郭颖杰教授学位类别：工程硕士答辩日期：2018年5月25日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用。，（但

3、纯学术性使用不在此限）否则应承担侵权的法律责任。吉林大学博士（或硕士）学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含其他任何个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研宄作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：＆ｔｆ曰期：ｚ叫？年乙月３曰SNaPshot方法检测ROS相关基因多态性与V

4、PA造成肝损伤的易感性的研究摘要药物性肝损伤(DILI)的发生率呈现逐年递增的趋势。已上市应用的化学药或生物药中有1100种以上具有潜在的肝毒性，是人类健康的重要威胁之一。丙戊酸(VPA)是临床上应用最广泛的一线抗癫痫药，在人体内主要经肝脏代谢，具有血药浓度和用药剂量的相关性较差，治疗窗较窄的特点。肝损伤是VPA最主要的毒副作用。大量研究表明，VPA引起的肝损伤与其经细胞色素P450(CYP450)的氧化产生的毒性代谢产物4-eneVPA和2,4-dieneVPA有关，这些毒性代谢产物能抑制线粒体β

5、-氧化，引起活性氧簇(ReactiveOxygenSpecies,ROS)水平上升和甘油三酯的堆积，从而导致肝脂质性病变、肝细胞死亡。引发炎症、肝脂质化，严重者甚至导致死亡。因此，VPA毒性代谢物和ROS的大量产生在VPA诱发的肝损伤中发挥了关键作用。由于VPA引发肝损伤的不可预知性，临床急需找到预判DILI发生的标志物。研究表明VPA引起的肝损伤与遗传因素密切相关。目前的研究热点多集中于VPA代谢相关酶的基因多态性与肝损伤的关系。基于氧化压力在VPA肝损伤中重要作用，清除ROS的抗氧化酶的基因多态

6、性可能通过改变抗氧化酶的活性影响肝损伤的易感性，但相关研究鲜有报道。本课题主要探讨清除ROS的谷胱甘肽转移酶(GSTP1)、NAD(P)H醌氧还原酶(NQO1)、金属硫蛋白酶(MT2A)、对氧磷酶(PON1)和谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)基因多态性对VPA引发肝损伤的影响。首先经过多步优化，我们建立了同时分析GSTP1rs1695，NQO1rs1800566，MT2Ars10636，PON1rs662和rs854560，GPX1rs1050450和rs1800668的7个基因多态性位点的SNaP

7、shot分析方法。然后分析了这些抗氧化酶基因多态性对96例癫痫患者服用VPA后肝损伤易感性的影响。结果表明，这7个SNPs位点在非肝损伤组和肝损伤组之间的分布频率不存在显著性差异。为了更深入地了解这些基因多态性在VPA代谢过程中的作用，我们进一步分析这7个SNPs位点与癫痫患者VPA用药剂量、血药浓度和剂量调整血药浓I度的关系。结果表明在非肝损伤组中，GPX1rs1800668突变可以明显提高患者调整血药浓度(P=0.035)，PON1rs854560突变可以明显降低患者的血药浓度(P=0.038)

8、。在肝损伤组中，GSTP1rs1695突变型携带者的VPA血药浓度明显低于野生型携带者(P=0.043)。说明这些基因型与VPA的代谢可能存在相关性，但由于样本数量较少，此结论还需更大的样本量进行验证。由于肝损伤组和非肝损伤组之间男女比例差别较大，本课题进一步分析了在男性和女性癫痫患者抗氧化酶基因多态性对肝损伤及对VPA代谢的影响。结果表明位于GPX1、GSTP1、NQO1和PON1的6个基因多态性位点频率分布对于肝损伤的易感性和VPA的代谢并无显著关联。但是女性癫痫