野大豆内生真菌筛选、鉴定及生物学活性研究

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1、单位代码：１０１６６痛／＾ｒ＾＼一硕士学位论文野大豆内生真菌筛选、鉴定及生物学活性研究周振宇论文作者：微生物学学科专业：指导教师：＾生命科学学院培养单位：全曰制培养类别：完成时２０１８年５月２０曰间：沈阳师范大学学位评定委员会单位代码：10166硕士学位论文野大豆内生真菌筛选、鉴定及生物学活性研究周振宇论文作者：学科专业：生命科学学院指导教师：卜宁培养单位：生命科学学院全日制培养类别：完成时间：2018年5月20日沈阳师范大学学位评定委员会学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在导师的指导下

2、取得的研宄成果。据我所知，除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人己经发表或撰写过的研宄成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中作了明确说明并表示了谢意。成欲，作者签名ｉ：：ｂ期学位论文使用授权声明本人授权沈阳师范大学研究生处，将本人硕士学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索；有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版，允许论文被查阅和借阅、、汇编学位论文。；有权可以采用影印缩印或扫描等复制手段保存保密的学位论文在解密后适用本规定。讀丄）作者签名：日期：野大豆内生

3、真菌筛选、鉴定及生物学活性研究摘要植物内生真菌是寄生于健康植物组织或器官内的一类真菌，它们不仅在寄主体内的特殊环境中完成几乎全部生活周期而不使其患病，而且在宿主的生长、发育、代谢、进化过程中与其协同进化并发挥重要作用。野大豆(Glycinesoja)是大豆是近缘种，具有繁殖性强、抗逆性强、适应性广、高蛋白等众多优点，从野大豆体内分离出的内生真菌一般具有与其宿主生长特点相适应的特殊基因和代谢途径及产物，并对宿主产生一定影响。分离筛选野大豆内生真菌，分析其活性作用，对进一步开发具潜在应用价值的野大豆内生真菌资源具有重要意义。本研究采用组织分离法对野大豆内生真菌进行分离，运

4、用形态学特征和分子生物学鉴定的方法进行鉴定；通过水培试验筛选抗性和促生效果优良的菌株，并经单因素实验和正交试验确定其最佳培养条件，通过超声波破碎、旋转蒸发、萃取等方法分析野大豆内生真菌发酵液对栽培大豆的促生活性成分及影响作用，主要研究成果如下：1.野大豆内生真菌的分离纯化。从健康的野大豆植株中分离得到41株内生真菌，来自于根、茎、叶的菌株分别为24株、12株、5株；经分子生物学鉴定为25种，其中2种来自于根，10种来自于茎，13种来自于叶，分别归属于链格孢属（Alternaria）、平脐蠕孢属（Bipolarissorokiniana）、毛壳菌属（Chaetomium

5、globosum）、盘菌亚门（Pezizomycotina）。2.活性菌株的筛选。采用水培法通过野大豆内生真菌发酵液对大豆幼苗生长和抗逆的影响筛选多功能活性菌株。YD-09菌株是具较明显活性的菌株之一；YD-09菌株发酵液处理的的大豆幼苗株高增长量与对照组相比有显著增加（P＜0.05），并使大豆幼苗具有显著的抗盐胁迫、镉胁迫和干旱胁迫能力（P＜0.05）。3.YD-09菌株特征和发酵条件优化。YD-09菌株为链格孢属（AlternariaNees）丝状真菌。其最适发酵条件为：以不加碳源的PDB培养基为基础培养基，乳糖4%，氯化钠1%，pH7，温度28℃，装液量50%，

6、120rpm发酵132h。4.YD-09菌株的活性成分研究。采用超声破碎、萃取、旋转蒸法等方法分离YD-09菌株的活性成分，并运用水培法证明其活性作用，结果显示胞外大分子产物具有抗盐胁迫的能力，胞内小分子产物具有促生长效果。5.YD-09菌株发酵液对小麦幼苗生长的影响。YD-09菌株发酵液处理的小麦幼苗其可溶性蛋白含量和SOD、POD、CAT酶活均显著高于对照组（P<0.05），可溶性糖和MDA含量低于对照组（P<0.05）。关键词：野大豆，内生真菌，促生，抗盐，活性物质，生物学活性IIScreening,IdentificationandBiologicalActi

7、vitiesofSoybeanEndophyticFungiAbstractPlantendophyticfungiarefungithatareparasiticinhealthyplanttissuesororgans.Theynotonlycompletealmostalllifecyclesinthespecialenvironmentwithinthehostwithoutcausingdisease,butalsointhegrowth,development,metabolism,andevolutionofthehost.Inthep