正常体重、超重和肥胖儿童肠道菌群差异研究

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1、学校代码：10286分类号：R12密级：公开UDC：614学号：152910正常体重、超重和肥胖儿童肠道菌群差异研究研究生姓名：孙海翔导师姓名：沈孝兵教授申请学位类别医学硕士学位授予单位东南大学一级学科名称公共卫生与预防医学论文答辩日期2018年6月7日二级学科名称劳动卫生与环境卫生学学位授予日期2018年6月20日答辩委员会主席王蓓教授评阅人S1800706S18007072018年6月8日硕士学位论文正常体重、超重和肥胖儿童肠道菌群差异研究专业名称：劳动卫生与环境卫生学研究生姓名：孙海翔导师姓名：沈孝兵STUDYONTHEDIFFERENCEOFINTESTINALFLORAI

2、NCHILDRENWITHNORMALWEIGHT,OVERWEIGHTANDOBESITYAThesisSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofMedicineBYSUNHai-xiangSupervisedbyProf.SHENXiao-bingSchoolofPublicHealthSoutheastUniversityMay2018东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研宄成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外论文中不包含

3、其他人己经发表或撰写过，的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：１东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研宄所、国家图书馆、《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司、万方数据电子出版社、北京万方数据股份有限公司有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的一致内容和纸质论文的内容相。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布（包括以

4、电子信息形式刊登）论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布（包括以电子信息形式刊登）授权东南大学研宄生院办理。研究生签名办本名為师签重７又摘要正常体重、超重和肥胖儿童肠道菌群差异研究摘要本研究运用高通量测序技术对正常体重、超重和肥胖儿童肠道微生物的16SrDNA进行测序，比较其微生物群落的物种多样性和群落组成差异；应用实时荧光定量PCR技术对三组儿童肠道内的直肠真杆菌、多形拟杆菌、双歧杆菌属和乳酸杆菌进行特异性扩增，比较它们在不同体重儿童肠道中的数量差异。结合以上两部分研究，形成对肥胖儿童肠道微生态结构的全面认识，分析肥胖儿童肠道菌群变化特点，探索肠道菌群与肥

5、胖的关系，以期为通过调节肠道菌群防治肥胖提供理论依据。目的：1.比较正常体重、超重和肥胖儿童肠道菌群物种多样性和群落构成，分析不同体重儿童肠道菌群是否存在差异性。2.比较正常体重、超重和肥胖儿童肠道中直肠真杆菌、多形拟杆菌、双歧杆菌属和乳酸杆菌数量，分析不同体重儿童肠道中这些种属的数量差异。方法：1.采集30例正常体重、35例超重和35例肥胖儿童粪便并提取DNA，然后对16SrDNAV4区进行扩增，使用Illumina-HiSeq高通量测序平台进行测序，运用生物信息学技术对结果进行分析，比较三组菌群丰度和物种多样性，寻找组间有显著差异的物种。2.采集54例正常体重、53例超重和59

6、例肥胖儿童粪便并提取DNA，根据待测菌的16SrDNA基因序列设计四种菌的特异性引物，进行实时荧光定量PCR反应，比较三组间四种菌的数量有无差异。结果：1.通过高通量测序，三组共获得了4320570条优质序列。Alpha多样性分析结果表明，三组的多样性指数中observed_species、Chao1指数和PDwholetree组间差异有统计学意义（P＜0.05），而Shannon指数和Simpson指数在不同体重组间的差异没有统计学意义（P＞0.05）。Beta多样性分析结果表明，正常体重和肥胖儿童肠道菌群组成差异显著（P＜0.05），而超重与正常体重和肥胖儿童肠道菌群结构组成差

7、异较小（P＞0.05）。具体来看，单型拟杆菌（Bacteroidesuniformis）、拟杆菌门S24-7科、霍尔德曼氏菌（Holdemania）、吉利蒙德(氏)颤螺菌（Guilliermondii）、克里斯滕森氏菌属（Christensenella）、消化链球菌科（Peptostreptococcaceae）、巨球型菌属（Megasphaera）、梭菌属（Clostridium）、哈氏梭菌（Clostridiumhathewayi）、厌氧棍状菌属（Anaerotr