《鉴定与检测》PPT课件

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1、细菌的鉴定与检测细菌遗传学与基因工程医学细菌学微生物工程细菌的鉴定与检测1.活菌检测2.免疫吸附分离法3.噬菌体检验第一节植物病原细菌检疫检验技术1、活菌检测分离培养法：营养培养基、选择培养基或鉴别培养基分离纯化得到的细菌。浓缩接种及离体叶检测：提取液浓缩接种感病植物，观测发病情况。例如：在1％灭菌水琼脂中加75×10－6的苯并咪唑，做平板，加感病植物叶片，针刺＋摩擦接种，培养（光、温、湿度），短期获得症状。如水稻细菌性条斑病菌和小麦细菌性黑颖病菌的检测。abcde24hpi36hpi72hpi96hpi132hpi水稻细菌性条斑病菌接种水稻叶片Whea

2、tbacterialblackChaffSelectivemedium在培养基中加入某种化学物质，使之抑制某些细菌生长，而有利于另一些细菌生长，从而将后者从混杂的标本中分离出来differentialmedium利用各种细菌分解糖类和蛋白质的能力及其代谢产物不同，在培养基中加入特定的作用底物和指示剂，一般不加抑菌剂，观察细菌在其中生长后对底物的作用如何，从而鉴别细菌。如常用的糖发酵管、三糖铁培养基、伊红-美蓝琼脂等。Stewart’sbacterialwiltofcornXanthomonas stewartii(Smith)Dowson分离鉴定进口玉米枯萎病

3、菌的选择性培养基-----黑色素培养基菌落中心黑色边缘透明、圆形、表面光滑。这一特异性状是其他选择性培养基所没有的，也是与其他细菌区分的重要标志。选用酵母浸膏的主要原因是它含有多种氨基酸、维生素和矿物质营养元素，对玉米枯萎菌生长有促进作用；甘油作碳源是合适的，因为它是很多细菌的不良碳源；牛胆酸钠能够抑制部分革兰氏阳性和阴性细菌，对枯萎菌生长无害；利用枯萎菌耐盐的特点，加大盐的用量，抑制了部分不耐盐的细菌；选用水溶黑色素作培养基成份，主要是使枯萎菌吸收黑色素，形成独特的特异性状，便于区分不同细菌。选择性较高、菌落容易辨认、抑制真菌效果好、平板效率较高。Irons

4、ulphiteagarforthermophilicanaerobedetection铁亚硫酸盐琼脂对嗜热厌氧菌检测enterobacteriaenrichmentbrothmossel肠道菌增菌肉汤培养基selectivemediumfortheisolationofentericpathogensparticularlySalmonellaandShigellaspecies.肠道致病菌：沙门氏菌和志贺菌属CulturemediaSelectiveisolationClostridiumperfringensTSCagar选择性分离产气荚膜梭菌differ

5、entialmediumBloodagarisacommondifferentialculturemediumusedtoidentifybacteriathatcauseshaemolysis溶血inblood.CulturemediaSelectiveisolationEnterobactersakazakii选择性分离阪崎肠杆菌OxoidBrillianceE.coli/coliformSelectiveAgarnowallowsimprovedconfirmationofE.colidirectlyoncultureplateSalmonellaGro

6、wingOnXLDAgar沙门氏菌2.免疫吸附分离法原理：结合血清学与平板分离技术，利用与抗原高度亲和性的抗体，来捕获目标细菌，样本中其他细菌均被冲洗掉，再将目标细菌转移或释放到培养基上生长。方法：平皿免疫吸附评价测定法和免疫吸附稀释培养法细菌细胞表面具有蛋白质、脂多糖（LPS）和胞外多糖等抗原分子，利用多克隆抗血清可以鉴定细菌的种。杂交瘤技术的发展为单克隆抗体（MAbs）的制备提供了方向；该技术很快被用于制备病原细菌的单克隆抗体，进行病菌特异性和流行学研究。包括凝集检验（agglutinationassays）、ELISA、Westernblot、免疫荧光（

7、immunofluorescence，IF）或免疫荧光菌落染色（immunofluorescencecolony-staining，IFC）以及侧流方法（lateralflowdevices）在内的单克隆抗体和多克隆抗血清对多种形式的检测应用是有效的。2.免疫吸附分离法凝集检验：凝集检验：人畜共患病之布氏杆菌凝集试验：待测血清中抗布氏杆菌抗体与胶乳试剂相遇，发生抗原-抗体反应，出现肉眼可见的凝集反应。试剂：羊、牛、猪三型诊断菌液。操作方法：待检血清（用生理盐水作1∶25、1∶50、l∶100、1∶200、1∶400、l∶800倍稀释）0.5ml，分别加诊断菌液

8、0.5ml，混匀。37℃水浴16～20