《转录后加工》PPT课件

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1、3.4原核与真核生物mRNA特征比较3.4.1原核生物mRNA特征1、半衰期短；2、许多mRNA以多顺反子的形式存在；多顺反子----指一条mRNA可以编码多条蛋白质肽链。一般是一组相邻或相互重叠基因的转录产物构成一个操纵子。3、mRNA的5/端无帽子结构，3/段没有多聚A的尾巴结构或只有较短多聚A的尾巴。4、5/端的AUG上游有7~12核苷酸的保守区-----SD序列。作用:是与核糖体30S小亚基内的16SrRNA的3/端序列互补，是起始的tRNA正确的定位于mRNA的5/端结构的起始密码子上原核mRNA的SD序列3.4.2真核生物mRNA特征1、半衰期相对较长；2、许多mRN

2、A以单顺反子的形式存在；3、mRNA的5/端存在帽子结构；4、绝大多数mRNA3/段有多聚A的尾巴结构。（1）帽子的结构（2）帽子的功能Ⅰ、有助于mRNA穿过核孔进入细胞质；Ⅱ、保护5′不被酶降解；Ⅲ、有助于在翻译时起始因子IFⅢ和核糖体识别。（3）帽子的类型及加帽位点Ⅰ在末端鸟苷的第7位上存在单个甲基化位点的称0号帽子（cap0）；Ⅱ在次末端核苷酸的核糖上的2′-0位点上还有一个甲基位点的称1号帽子(cap1)；Ⅲ在第三个核苷酸的核糖上（2′-0）有甲基化位点的称2号帽子（cap2）。帽子的类型（4）加帽生化过程Ⅰ剪切前加帽如呼肠病毒，牛豆病毒Ⅱ剪切后加帽如疱疹病毒和口炎病毒加

3、尾（1）加尾作用和时间多聚A是mRNA由细胞核进入细胞质所必需的形式。多聚A是转录后加上去的。（2）加尾过程Ⅰ特殊组分(CPSF)识别AAUAAA并指导其它的活性Ⅱ剪切因子(CF)在加尾位点AAUAAA下游11－30nt(核苷酸)处剪切RNA；Ⅲ末端腺苷转移酶[poly(A)聚合酶]合成poly(A)尾巴；Ⅳ结合蛋白（PBP）与poly(A)结合，反应停止。加尾生化反应第一步加一个短的寡聚A序列（10nt），此反应依赖于AAUAAA序列（加尾信号）；此反应由poly（A）聚合酶在特殊因子指导下完成的。第二步是寡聚A尾巴延伸到240nt的长度。此反应并不需要AAUAAA序列，但需要

4、一个识别寡聚A并指导poly（A）聚合酶延伸的刺激因子。3.5RNA合成的延伸终止和抗终止RNA合成的延伸3.5.1延伸速度快慢和转录暂停1、延伸速度延伸速度快慢与DNA模板含G、C的区域有关；在富含G、C区慢或暂停。2、转录暂停当RNA聚合酶转录过程遇到特殊序列，转录速度变慢为0.1b/s或0称为暂停；这段序列称为暂停信号.3.5.2RNA合成的终止1、一旦RNA聚合酶启动了基因转录，它就会沿着模板5‘→3’方向不停地移动合成RNA链，直到遇到终止信号时才释放新生的RNA链，并与模板DNA脱离。2、模板DNA上都有终止转录的特殊信号--终止子，每个基因或操纵子都有一个启动子，

5、一个终止子。3、在新生RNA中出现发卡式结构会导致RNA聚合酶的暂停，破坏RNA-DNA杂合链5'端的正常结构。寡聚U的存在使杂合链的3'端部分出现不稳定的rU·dA区域。原核转录的终止以大肠杆菌为例（体外实验）1、终止子（terminator,t）弱终止子－需要ρ因子（rhofactor）又称为依赖ρ因子终止子强终止子－内在终止子（intrinsicterminators）又称为不依赖ρ因子终止子依赖于ρ因子的终止ρ因子是一个相对分子质量为2.0×105的六聚体蛋白。它能水解各种核苷三磷酸，实际上是一种NTP酶。由于催化了NTP的水解，ρ因子能促使新生的RNA链从三元转录复合物

6、中解离出来，从而终止转录。作用：ρ因子即附着在新生的RNA链上，靠ATP水解产生的能量，沿着5‘→3’方向朝RNA聚合酶移动，到达RNA的3‘-OH端后取代了暂停在终止位点上的RNA聚合酶，并从模板和酶上释放RNA，完成转录过程。终止过程需要消耗能量，所以，ρ因子具有终止转录和核苷三磷酸酶两种功能。b、不依赖于ρ因子的终止若终止点上游存在一个富含GC碱基的二重对称区，由这段DNA转录产生的RNA容易形成发卡式结构；在终止点前面有一段由4-8个A组成的序列，导致转录产物的3‘端为寡聚U。这两种结构特征的存在同样决定了转录的终止。    在新生RNA中出现发卡式结构会导致RNA聚合

7、酶的暂停，破坏RNA-DNA杂合链5'端的正常结构。寡聚U的存在使杂合链的3'端部分出现不稳定的rU·dA区域。强终止子的结构…NNAAGCGCCGNNNCCGGCGCTTTTTTNNN……NNTTCGCGGCNNNGGCCGCGAAAAAANNN…DNA…NNAAGCGCCGNNNCCGGCGCUUUUUUNNN…RNA强终止子的结构特点(1)有回文结构存在；（2）茎的区域富内含G-C；(3)强终止子3′端上有6个U；NNNNNG·CC·GC·GG·CC·GG·CC·U…NNN