《戴安HPLC基础知识》PPT课件

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1、液相色谱基础知识液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobilephase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationaryphase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。液相色谱法开始阶段是用大

2、直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法(HighperformanceLiquidChromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(HighPressureLiquidChromatography，HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(HighS

3、peedLiquidChromatography，HSLP)。也称现代液相色谱。色谱起源石油醚碳酸钙颗粒色素玻璃柱经典液相色谱色谱分离的机理分离是一个物理的过程流动相（MobilePhase）固定相（StationaryPhase）样品（溶解于流动相中的溶质）色谱法分类按两相的物理状态分：气相色谱法(GC)、液相色谱法(LC)和超临界流体色谱法(SFC)。气相色谱法适用于分离挥发性化合物。GC根据固定相不同又可分为气固色谱法(GSC)和气液色谱法(GLC)，其中以GLC应用最广。液相色谱法适用于分离低挥发性或非挥发性、热

4、稳定性差的物质。LC同样可分为液固色谱法(LSC)和液液色谱法(LLC)。超临界流体色谱法以超临界流体（界于气体和液体之间的一种物相）为流动相（常用CO2），因其扩散系数大，能很快达到平衡，故分析时间短，特别适用于手性化合物的拆分。按原理分：吸附色谱法(AC)、分配色谱法(DC)、离子交换色谱法(IEC)、排阻色谱法(EC，又称分子筛)、凝胶过滤(GFC)、凝胶渗透色谱法(GPC）和亲和色谱法,此外还有电泳。按操作形式分：纸色谱法(PC)、薄层色谱法(TLC)、柱色谱法HPLC的特点和优点HPLC有以下特点：高压：压力可

5、达150～300Kg/cm2。高速：流速为0.1～10.0mL/min。高效：可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。高灵敏度：紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：速度快：通常分析一个样品在15～30min，有些样品甚至在5min内即可完成。分辨率高：可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。灵敏度高：紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg柱子可反复使用：用一根色谱柱可分离不同的化合物。样品量少，容易回收：样品经过色谱柱后不被破坏，

6、可以收集单一组分或做制备。什么是高效液相色谱HighPerformanceLiquidChromatography高效液相色谱法，简称：HPLC是利用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，按照固液相之间的分配机理对混合物进行分离测定的色谱方法。广泛应用于各个领域：医药/环保/石化/生命科学/食品及农业……在技术，理论及应用上仍处于发展阶段HPLC在药学中的应用含量测定（最普遍应用）还包括有关物质检测，杂质/有害物质限量检测。指纹图谱检测主要用于中药注射剂。鉴别与薄层鉴别类似，被测物质与对照品具有相同保留时间相当

7、于具有相同Rf值，即初步认为同一物质。纯度检测通常用面积归一化法检测对照品纯度。分离纯化样品或制备对照品（仅限制备型色谱）高效液相色谱仪器介绍HPLC的仪器配置色谱泵自动进样器柱温箱及色谱柱检测器数据处理系统溶剂液相色谱的基本流程图流动相泵色谱柱检测器输液系统分离系统检测系统记录系统AEGBCDF进样阀进样系统P680A色谱泵前面板屏幕光标键高低压极限显示直接操作键泵开关键功能键遥控状态显示流速显示压力显示P680A色谱泵内部结构混合腔真空脱气泵(在线脱气)压力传感器蠕动泵清洗瓶一般为50％甲醇，每周更换一次清洗阀比例阀

8、进口单向阀出口单向阀泵工作泵头平衡泵头压力传感器混合腔清洗阀真空脱气泵比例阀废液P680ALPG流路图低压四元剃度泵（只有一个泵，四个通道，溶液泵前混合）需配在线脱气机，因为容易形成气泡P680HPG流路图工作泵头平衡泵头压力传感器混合腔清洗阀高压二/四元剃度泵（有二个泵，二/四个通道，溶液泵后混合）无需配在线脱气机