苏云金杆菌晶体蛋白对猪蛔虫的作用及猪蛔虫重组As37蛋白的免疫保护研究

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1、华中农业大学学位论文独创性卢明及使用授权书学位论文是否保密否如需保密，解密时间年月日独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定．与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意．研究生签名：≥勺另持】时间：扣。6年6月，2日学位论文使用授权书本人完全了解“华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定”，即学生必须按照

2、学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电子版，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印，缩印或扫描等复制手段保存，汇编学位论文．本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容．注：保密学位论文在解密后适用于本授权书．学位论文作者签名：玛镊玛导师签名：料依文签名日期：州6年g月7日签名日期：御5年6月7日苏云台杆菌晶体蛋白对猪蛔虫的作用及猪蛔虫荤组As37蛋白的免疫保护研究摘要猪蛔虫病是仔猪常见的多发性寄生虫病，可导致仔猪的腹泻、消瘦、贫血，严重的导致仔猪死亡，严重危害养猪业。目自口猪蛔虫病的防治以眯

3、唑类药物驱虫为主，这些药物在治疗猪蛔虫的同时对动物机体均有不同程度的副作用，且不同程度的残留，危害人类健康、污染环境，所以需要寻找防治猪蛔虫病的一种新药。自1972年发现苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis，Bt)对植物寄生线虫具有杀虫活性以来，随后发现Bt伴胞晶体毒素对蛇形毛圆线虫，捻转血矛线虫，日本血吸虫等动物寄生虫的毒性。本研究旨在寻找高毒力的Bt菌株对猪蛔虫进行有效治疗。另外，关于猪蛔虫的免疫研究近年来取得了一定的进展，国外先后报道了猪蛔虫重组抗原的免疫活性；国内在猪蛔虫的免疫上还是空白，尚未见到商用猪蛔虫疫苗。为了更好地防治猪蛔虫

4、，本研究克隆了猪蛔虫rAs37基因，构建原核表达载体进行高效表达，并对表达蛋白的免疫活性进行了分析，为开发猪蛔虫亚单位疫苗打下基础。主要研究工作和结果如下：1．Bt伴胞晶体毒素对体外培养的猪蛔虫幼虫的毒力将感染性猪蛔虫卵对小白鼠进行人工感染，获得三期，四期蛔虫幼虫，经体外培养，用BtYBT-1517，YBT-1518，YBI"-152I，YBT-1532，YBl"-1537，Rl，R2伴胞晶体毒素分别作用于幼虫，结果发现七种毒素均对猪蛔虫三期幼虫有毒杀作用。随着作用时间的延长，毒素浓度的增加，虫体运动缓慢，死亡率增加，其在24h、48h时的半数致死剂量分别为O．

5、875mg／mL，O．434mg／mL；O．934mg／mL，O．452mg／mL#1．375mg／mL，O．843mg／mL：1．023mg／mL，O．623mg／mL；1．112medmL，O．674mg／mL；O．951mg／mL，O．458mg／mL：O．958mg／mL，O．460mg／mL·YBT-1517对猪蛔虫三期幼虫杀虫效果最好，YBI"-1518与其毒力相当，丽YBT．1521的半数致死量较其他菌株大。毒素含量越高，幼虫死亡率越高，毒素作用时间的延长，其半数致死剂量降低。YBTol517，YBT-1518，Rl，R2四种菌株的晶体蛋白对四期幼

6、虫有毒杀作用。其在24h、48h时的半数致死剂量分剔为0．935mg／mL，O．452mg／mL；O．875mg／mL，0．415mg／mLO．904mg／mL，O．453mg／mL；0．886mg／mL，O．448mg／mL·YBT-1518、YBT-1517、Rl、R2四种晶体蛋白毒力相当，其中YBT-1518晶体毒素对猪蛔虫四期幼虫的杀虫效果略高于其它三种毒素。2．Bt伴胞晶体毒素对小鼠体内猪蛔虫幼虫不同作用方式的研究及其免疫定位感染猪蛔虫的小鼠经静脉注射，肌肉注射、灌胃、腹腔注射YBT-1517，YBT．1518晶体毒素，结果发现毒素均对小鼠体内蛔虫幼虫

7、有显著驱杀效果，静脉注射减虫率最高，效果极显著，高于其它三种方式，而肌肉注射则次之，灌胃与腹腔注射无差异．YBT-1517减虫率分别为72．7％、19．1％、14．6％、14．36％；YBT-1518减虫率为70．87％、32．83％、19．10％、20．51％。YBT-1517与YB'r-1518晶体蛋白毒力相当。华中农业大学2006届博十学位论文通过对YBT-1517晶体蛋白的免疫组织化学定位研究，表明晶体蛋白主要作用于蛔虫的表皮及肠道，这与国外学者报道的晶体蛋白作用动物寄生线虫部位一致。3．Bt伴胞晶体毒素对猪体内蛔虫的作用及其血液生理生化指标的分析对感染

8、猪蛔虫的仔猪通过肌肉注射