大花蕙兰组织培养的关键性技术研究

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1、垩塑塑主堂篁堡苎主壅塑茎摘要本文主要针对大花蕙兰组织培养中的几个关键性技术问题，分别以茎尖和假鳞茎为外植体，探讨了优化配方、原球茎增殖、褐变机理以及褐变防止等问题，重点研究了褐变的机理，为大花蕙兰的工业化育苗提供了技术参考依据，同时也为木本植物中常见的褐变问题的解决奠定了理论基础。主要的研究结果如下：1．在对大花慧兰最佳配方的培养基筛选过程中，褥到如下结论：①原球茎诱导培养阶段：最适培养基为MS+BAl．5mgl+NAA0．1mg／1，2个月后启动率可达81．4％；②原球茎增殖培养阶段：最适培养基为MS+BAl．0mg／l+NAA0．

2、03m鲥，原球茎增殖最快，一个月后增殖量可达5．8；③原球茎分化培养阶段：MS+BA0．5m∥l+NAA0，8mg／l最好，一个月分化率可达89．4％；④生根培养阶段：促进根生长的最适培养基是1／2MS+BAO．3mg／1-4-NAA0．5m∥1+香蕉泥150∥1，根系粗壮。2．各种因素对原球茎增殖的影响：液体振荡培养、薄层切割培养、5个大小的切块利于原球茎的增殖(见图3．1～图3．3)。3．分析对照组和热激组的总酚含量(TP)、褐变度(BD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸裂解酶(PAL)活性等变化关系(见图4．1～图4．4)，可以

3、看出热激组TP、BD、PAL活性以及PPO活性都比对照组低。推测伤害时褐变的机理可能是PAL酶先催化苯丙氨酸合成单酚或多酚衍生物，衍生物又与PPO酶作用，从而导致褐变的发生。热激时，可能生成了热激蛋白(HSPs)而不是PAL酶，导致合成的总酚含量降低，因而PPO酶和其他未知物质就与较少的酚类物质作用，抑制褐变的发生。4．褐变的控制：预处理、抗坏血酸、活性炭的加入对褐变的防止作用甚微；聚乙烯毗咯烷酮(PVP)对褐变有一定的防止作用；然而5rain与2rain热激组对防止褐变起到了满意的效果，尤其是5min热激处理组防止效果更好。关键词：

4、大花蕙兰，褐变，热激，原球茎，苯丙氨酸裂解酶，多酚氧化酶要望型塑堑生兰型塑垒茎一蒌奎塑至ABSTRACTInthisarticle，severalcrucialtechnicalquestionshavebeenstudiedwithmeristemorpseudobulbasexplants，includingthebestculturemedium，multiplicationofprotocormlike—body(PLB)，mechanismofbrowning，andmethodofbrowningprevention．Th

5、eproblemofbrowningwasemphasis．Therapidpropagationsystemtargetingtoprovidetechnicalreferenceforthemassproductionofcymbidiumgrandifloriumhasbeensetup．ThestudyonthebrowningmechanismlaidafoundationforthesettlementofthecommonprobleminWOOdyplantculture．111emainresultsofresear

6、chinthis血esisarefollowed：1．Theresultsofthebestculturemediumwerereportedasfollow：①TheinducementmediumofPLB：MS+BAl．5m刚+NAAO．1m鲫，theinductionrateCOuldbe81．4％afer2months．1②ThemultiplicationofPLB：MS+BAI．Omg／I+NAA0．03mg／1，thequantityofmultiplicationcouldbe5．8．(9Thedifferentia

7、tionofPLB：MS+BA0．5mg／i+NAA0．8mg／1，thedifferentiationratecouldbe89．4％afteronemonth．④Themediumofrooting：1／2MS+BAO．3rag／1+NAA0．5mg／l+bananamudl50∥1，therootsarestrong，2．Thecultureconditionas,followswasfoundtobesuitableformultiplicationofPLB：liquidvibrationculture，thincrosss

8、ection(TCS)cultureand5protocormlike—bodyofsectionsize(seefromFigure3．1toFigure3．3)．3．Thecomparisonoftotalpheno