广西番木瓜曲叶病研究

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1、浙江大学硕士学位论文广西番木瓜曲叶病研究姓名：吴楚钊申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：周雪平20060501摘要双生病毒是一类具有孪生颗粒的单链环状DNA病毒。目前，双生病毒已经在世界范围内广泛发生并已经在很多国家的经济作物上引起严重的危害。在我国广东、广西、云南、福建和海南的烟草、番茄、番木瓜等作物和杂草上相继的发现了多种双生病毒。本论文主要对广西番木瓜曲叶病害的病原进行分子鉴定。对采自广西地区的番木瓜样品进行PCR检测发现，在大多数样品中都同时存在中国番木瓜曲叶病毒(PaLCCNV)和中国

2、番茄曲叶病毒(TjLCoⅣ)两种双生病毒，并且还存在一种卫星DNAB一即中国番茄曲叶病毒DNAB(ToLCCNVDNAI])。为了研究这两种病毒复合侵染的致病机制，我们构建了这两种病毒的侵染性克隆。对PaLCCNV的致病性研究发现，单独的PaLCCNV无法在寄主植物上诱导症状，只有与ToLCCNVDNA[3同时接种才能在本氏烟和心叶烟上诱导曲叶症状。将PaLCCNV、ToLCCNV和ToLCCNVDNA8三者共同接种后，PaLCCNV和ToLCCNV都能在寄主植物上复制，并且诱导曲叶症状。在研究ToLC

3、CNVDNA[3的基础上，我们在番木瓜样品OlOOCP发现一个DNAl3重组分子和一个缺皇A-Rich区域的DNAB缺失分子。DNA[j重组分子是ToLCCNVDNA[3在A-Rich区域的部分序列与PaLCCNVC1基因上部分序列发生重组产生的。为了研究这两个DNA[3重组分子和DNA[，缺失分子致病机制，我们构建了这两个DNA[j重组分子和DNA[3缺失分子的侵染性克隆。将这两个DNA[，分子的侵染性克隆分别与PaLCCNV或ToLCCNV的侵染性克隆共同接种，都不能产生任何症状。PCR检测发现这两

4、种DNA[，分子都能在寄主植物中复制。在番木瓜样品G100和G136中发现了一类与PaLCCNV和ToLCCNV不同的新的双生病毒，G100全长基因组克隆和序列测定分析表明该病毒的全长是2742bp，其基因组结构属于旧世界双生病毒。全序列比较发现该双生病毒与在广西杂草赛葵上发现的赛葵曲叶病毒的同源性最高，达到98．3％。按照双生病毒的分类原则，该双生病毒为赛葵曲叶病毒的分离物。关键词：双生病毒中国番木瓜曲叶病毒中国番茄曲叶病毒赛葵曲叶病毒DNAl3IIAbstractGeminivirusesareag

5、roupofsingle-strandedcircularDNAviruseswithtwinnedparticlesoccurringworldwide．Untilnowgeminiviruseshavecausedsignificantyieldlossestomanyeconomicallyimportantcropsinmanycountriesoftheworm．Inrecentyears，severalbegomovirusesinfectingtobacco，tomatoandpapaya

6、havebeenreportedinGuangdong，Guangxi，Yunnan，FujianandHainanprovincesofChina．Inthisthesis，etiologyofpapayaleafcurldiseaseinGuangxiprovincewerestudied．PCRdetectionshowedmostpapayaleafcurlsamplesfromGuangxiprovincewereassociatedwithPapayaie《curlChinavirustPa

7、LCCNV)andTomotole酊eurlChinavirus(ToLCCNV)aswellasToLCCNVDNAl3．Toinvestigatethepathogenicityofmix‘infection，infectiousclonesofthetwovirusesareconstructed．InfectivitytestsshowedPaLCCNValonecouldnotinducesymptomsinplants．LeafcurlingsymptomscouldbeinducedinN

8、icotianabenthamianaandf吐glutinosaplantswhenPaLCCNVwereco．inoculatedwithToLCCNVDNAB．WhenPaLCCNV,ToLCCNVandToLCCNVDNA15wereco，inoculatedLbothPaLCCNVandToLCCNVcouldreplicateinplantswithleafcuffingsymptoms，ArecombinantDNA13mol