ERβpERβ在小鼠发情周期和早期妊娠卵巢中表达与分布的研究

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1、摘要摘要雌激素（estrogens）在哺乳动物生殖内分泌系统有着重要的作用，是最主要的内源性激素，对雌性哺乳动物的卵巢发育、卵泡成熟具有重要的调控作用。雌激素通常是与雌激素受体（estrogenreceptor，ER）结合而发挥胞内信号转导作用的，ER形成同源或异源二聚体，而在二聚体发生磷酸化后，其能够参与核调控相关的雌激素敏感基因的启动子活化，从而发挥生物学作用。ER是核受体超家族的重要组成成员，主要包括雌激素受体α亚型（estrogenreceptoralpha，ERα）和雌激素受体β亚型（estr

2、ogenreceptorbeta，ERβ）。两者的表达呈现高度的组织特异性，而小鼠卵巢中两者均有表达，但在表达量和生理作用上存在差异。近期实验证实，在啮齿类动物和人卵巢中，ERβ在转录水平和蛋白表达水平上均远高于ERα的相应指标。而进行ERβ基因敲除的小鼠，其卵巢功能基本正常，卵泡可以发育至有腔卵泡，但排卵次数和数目却明显减少。这些都表明ERβ对正常卵巢生理功能维持是必要的。但目前针对哺乳动物生殖系统中ERβ的定位表达分布研究较少，尤其是ERβ的活化形式——p-ERβ。因此以正常小鼠发情周期及妊娠期卵巢

3、为实验模型，进行ERβ和p-ERβ在其中的定位表达研究，并探讨该分子两种活性状态与卵巢功能执行的关系是必要的。本研究能够雌激素受体家族蛋白在卵巢中作用机制的基础研究提供一定的理论和实验依据。再者，ERβ与卵巢癌变的发生有一定关系，研究表明ERβ在卵巢肿瘤中的表达量比正常卵巢中的表达量有所降低。因此，本研究在生殖系统肿瘤的预防、诊断和治疗方面也有重要的作用和意义。本实验以成年雌鼠卵巢为实验材料，分别采用westernblot技术和免疫组织化学方法，研究ERβ和p-ERβ在小鼠卵巢各发情周期和妊娠早期（1~

4、11d）表达量与定位分布的变化规律。实验结果显示：1.发情周期的westernblot实验结果表明：ERβ和p-ERβ在小鼠发情期卵巢中均呈现高水平表达，而在其它时期两者的表达量均较低，且各自相互间差异不显著。2.在小鼠妊娠早期的westernblot实验结果表明：处于1d，3d，4d，5d，7d，9d，10d，11d妊娠日龄的小鼠卵巢内，在各处理中ERβ的表达水平无显著差异；而p-ERβ的表达水平在妊娠早期1d，3d，4d，5d无显著差异，但自7d开始升高，而后保持在较为稳定的水平。3.各发情周期的免

5、疫组织化学结果揭示，伴随卵泡生长，ERβ在卵母细胞质、颗粒细胞中的表达量均有所升高，在卵母细胞核中并没有分布；伴随黄体的退化表达量下降；p-ERβ除在卵母细胞核中极强表达外，其他部位表达趋势类似于ERβ。4.免疫组织化学实验结果揭示在妊娠早期各天，ERβ在黄体中高度表达并没有显著变化。p-ERβ在妊娠早期的黄体中的表达特点与ERβ类似，但有增加的趋势。以上结果表明：ERβ及其磷酸化形式——p-ERβ在小鼠发情周期以及妊娠早期卵巢中表达有规律性的变化，揭示ERβ与p-ERβ在雌性小鼠发情周期及妊娠早期，对

6、卵巢发育、卵泡生长、卵母细胞成熟和黄体形成有重要的作用。关键词：雌激素受体β；磷酸化雌激素受体β；小鼠卵巢；卵泡；黄体I东北农业大学理学硕士学位论文AStudyonERβ/p-ERβExpressionandDistributioninMouseOvariesDuringOestrousCycleandEarlyGestationalPeriodAbstractEstrogen,whichhasimportanteffecttothemammaliangenitalsystemandendocriniu

7、m,isoneofthechiefendo-gonadalhormones.Itisveryimportanttoregulatethedevelopmentofovaryandfolliclesmaturityforfemalemammal.Withestrogenreceptor(estrogenreceptor,ER),estrogencanformhomodimerorheterodimer,andwhenthedimmersarephosphorylated,theyactivatethepr

8、omoterofestrogensensitivegenes,whicharerelatedwithnucleusregulation,thentheybringintobiologicaleffect.ERbelongstonuclearreceptorsuperfamily,includingestrogenreceptoralpha(ERα)andestrogenreceptorBeta(ERβ).Theirexpressionsho