捕食线虫性真菌分离与生物学特性研究

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1、中国农业大学博士学位论文捕食线虫性真菌分离与生物学特性研究姓名：杨晓野申请学位级别：博士专业：预防兽医学指导教师：汪明2002.6.1中文摘要本文对寄生虫生物防治及捕食线虫性真菌的研究历史、现状及发展方向进行了系统的阐述。并采用微生物学、生物化学和寄生虫学实验技术，从捕食线虫性真菌的分布规律、分离培养技术、形态学结构、生长特性、捕食活性、捕食效力、杀虫机理、杀虫作用等诸方面进行了深入的生物学特性研究和探讨6f结果如下：从自然界中分离到两类活性较强的捕食线虫性真菌菌株：即套捕型捕食线虫性真菌和粘捕型捕食线虫性真菌，它们具有菌环、菌网或菌结捕食性结构。这些捕食线虫性

2、真菌在分生孢子、捕食性结构及其它生物学特性上有一定差异。描述了三种代表性的菌株，其中9actylariapy，，，Dmj娟自株为国内新记录。研究显示土壤和粪便的平均分出率为39．2％。，在培养基中加入双抗(青链霉素)。可提高首此分离的分出率．在借鉴国外分离培养捕食线虫性真菌方法的基础上，在国内研究出了以0．49／L玉米粉琼脂培养基作为主要培养基，分离培养捕食线虫性真菌的实验室技术。其成本低、操作简便、效果好、重复性强，弥补了我国在这方面的空白。作者在捕食线虫性真菌种类鉴定方面提出了自己的观点：认为鉴定捕食线虫性真菌除应依据分生孢子形态外，还应根据捕食性结构等形态

3、学特征及某些生长特性，必要时可结合分子生物学技术来综合进行种类的确定。捕食线虫性真菌分生孢子对低温冷冻有极强的耐受力，可用低温冷冻法保存捕食线虫性真菌分生孢子，其方法简便易行．首次解决了国内外在捕食线虫性真菌菌种保存中的难题。另外，作者还提出了0．49／L玉米粉液体培养基(删A)保存菌种的方法．作者证实线虫体内确实存在着可以诱导捕食性结构产生的物质。但其作用是很有限的。捕食线虫性真菌菌株对线虫第一、二期幼虫和第三期幼虫的作甩比较说明．第三期幼虫可以刺激菌株产生较多的捕食性结构．作者首次研究证明线虫虫卵、线虫成虫不能导致捕食性真菌产生捕食性结构。试验结果表明捕食线

4、虫性真菌菌株批量培养最适宜的培养基是玉米粒，在20"C培养3周后，分生孢子产生的数量最多。而且纯净。没有发芽。适于收集使用．为今后捕食线虫性真菌的实际应用奠定了基础。捕食线虫性真菌一少孢节丛孢菌菌株分生孢子在体外对绵羊瘤胃液、真胃液、十二指肠液具有耐受力，在通过兔子消化道后仍能存活；另外，DactyJarJapyriformis菌株给绵羊口服后所产生的杀虫效果及试验动物粪便真菌培养证实Bactylariapyriformis菌株可以通过绵羊消化道；该菌株是继国际上Ouddingtoniaf]agrans真菌之后，又一个具有·开发潜力的捕食线虫性真菌。捕食线虫性真

5、菌菌株在0．49几玉米粉琼脂培养基上，对自然混合感染马的线虫第三期。幼虫捕食率为78．2～80．1％；在实验室条件下，少孢节丛孢菌菌株对马粪便中线虫幼虫的杀虫率高达98．7％；与对照组相比有显著差异。而且加入粪便的分生孢子数量在达到一定阈值后，再加入分生孢子，则杀虫率不再增加。此结论对捕食线虫性真菌今后临床的应用具有实际指导意义。临床初步应用研究试验表明：Dactylariapyriformis菌株悬浮液制剂在外界自然环境条件下，喷洒于粉碎的马粪和羊粪中，对粪便线虫幼虫的杀虫率分别可达98．05％。以3×107或6×107个孢子剂量，给羊经口分2次投服，对线虫幼

6、虫的杀虫率分别可达89．9啸92．8％。上述结果为将来捕食线虫性真菌用于动物寄生性线虫病防治，展现了光明的前景。基于18SrDNA序列，作者首次利用分子生物学技术，在国内对捕食线虫性真菌一一少孢节从孢菌菌株的种类鉴定及种系发育进化进行了研究。结果显示：捕食线虫性真菌——少孢节从孢菌Al株(ArthrobotrysoligosporaAI)的18SrDNA全基旦度虱为1769bp，在进．化树上与同种国外的2个分离株的同源性分别为94．7％和93．1％。此结果与捕食性结构的特点相一致。进化树及同源性比较表明丛孢菌属(Arthrobotrys)确实存在有株的差异．试‘

7、验还证实捕食线虫性真菌的捕食性结构与其种系发生有关。∥＼．，⋯／。．}、固妒，』≮。关键词：生物控制；捕食线虫性真菌；(夯蓠；7生物学特性：线《If7。，／．(附图48幅，表40个)II气0；ln、hABSTRACTStudiesonIsolationandBiologicalPropertiesofNematode-trappingFungi(CollegeofVeterinaryMedicine，ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100094，China)Ph．DCandidate：YangXiaoyesubject：Pr

8、ophylacticVe