《克隆与治疗性克隆》PPT课件

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1、克隆及治疗性克隆Clone一词来源于希腊文，原意是“扦插的枝条，及无性繁殖。1902年，德国植物学家Aberrant提出，植物的体细胞具有母体的全部遗传信息，并且能发育成为完整个体的能力。1903年，Webber将这一概念引入园艺学。至此，克隆这一概念逐渐被用于细胞生物学、动物学、医学等。第一节克隆的概念一、克隆和治疗性克隆的一般概念克隆(clone)指通过无性方式由单个细胞或个体产生的、和亲代非常相似的一群细胞或生物体，在不发生突变的情况下，一个克隆内的所有员具有完全相同的遗传构成。克隆的概念强调两点：1、以无性的方式进行增殖或繁殖；2、一个克

2、隆中的每一成员其遗传构成完全相同。体细胞克隆：供体细胞核是体细胞的称为体细胞克隆。体细胞克隆分为：生殖性克隆或繁殖性克隆（reproducticecloning）治疗性克隆（therapeuticcloning）生殖性克隆是一种“复制”动物个体的生物技术，是成体细胞核移植到去核卵母细胞中，或融合形成重组胚，使已分化的细胞核重新编程，再移植到代母或者供卵者子宫内发育成为新个体。治疗性克隆则是将患者的体细胞核移入去核的卵细胞形成重构胚，经过一定处理，待发育至囊胚（14天以前），分离内细胞团，纯化，培养、筛选、建立胚胎干细胞系，定向诱导分化成为“预定”

3、的细胞、组织器官；移植入病人病变部位，或作为组织工程用的种子细胞，以取代患者已丧失功能的细胞，修复或取代组织、器官，达到治疗的目的。治疗性克隆技术是体细胞克隆技术、胚胎干细胞技术和移植技术相结合的一项新的生物技术。克隆分为四个层次：分子克隆。细胞克隆组织器官克隆个体克隆植物克隆动物克隆指利用DNA重组技术将特定基因或DNA序列插入载体或PCR技术获得大量相同基因或DNA序列的过程。分子克隆指一个祖先细胞经分裂，增殖而形成一群细胞（至少50个以上），这些细胞具有相同的遗传组成。亦称无性繁殖细胞系。细胞克隆二、克隆技术发展史（一）克隆技术的萌芽先成论

4、（TheoryofPriformationism）认为个体发生，其所应形成的形态构造于发生之始就预先存在，待发育时则逐渐展开而形成明显的形态构造，这种学说就是先成论。为后成论的对应词。先成论的极端形式就是所谓生殖预成论。从历史来看，在古希腊时代就已有先成论的思想；及至近代，特别是由于显微镜的应用，对微小的形态结构得以掌握其轮廓，因而成为有力的学说，17世纪和18世纪的著名生物学者马尔比基（M．Malpighi）、勒文虎克（A．Leewenboek）、J．Swammerdam、C．Bonnet等对于这个学说曾有过不同的解释。这种古典的先成论，随着显

5、微镜的进一步发展，以及发生学研究的进展,不久就从根本上被推翻了。就现在的情况来看，对于发生因素问题，认为除遗传子组成以外，而没有任何其他东西，与古典的发生理论完全相同。（二）现代克隆技术的开端克隆技术在现代生物学中被称为“生物放大技术”，它已经历了三个发展时期：第一个时期是微生物克隆：即用一个细菌很快复制出成千上万个和它一模一样的细菌，而变成一个细菌群；第二个时期是生物技术克隆：比如用遗传基因――DNA克隆；第三个时期是动物克隆：即由一个细胞克隆成一个动物。克隆绵羊“多利”由一头母羊的体细胞克隆而来，使用的便是动物克隆技术。第二节克隆及治疗性克隆

6、技术路线克隆动物世界上第一只克隆哺乳动物：1981年，Hoppe等发表文章，声称从早期胚胎细胞克隆出3只小鼠，当时对其结论学术界有争论。1986年，Prather将早期牛胚胎细胞核移入到牛卵中，在绵羊输卵管中发育成囊胚，再植入代孕母牛子宫，克隆小牛犊出生。以上实验所用供体细胞是早期胚胎，而不是分化细胞，或成体细胞。克隆羊——Dolly克隆步骤：a.取苏格兰黑脸母羊的未受精卵，去细胞核用作受体。b.取芬兰白脸母羊乳腺细胞,在培养基中培养用作供体。c.将供体细胞核移植到受体去核卵细胞,放在培养器中，用电击法使其膜融合.d.继续培养6天后形成桑椹胚.e

7、.将桑椹胚移入苏格兰黑脸母羊子宫.f.苏格兰黑脸母羊怀孕148天后产生白脸多莉.在多莉羊诞生后，克隆技术取得了很大的发展，美国夏威夷大学的科学家们于1998年7月利用体细胞克隆技术克隆出卡姆莉娜鼠、50只，2000年7月，相继克隆出猪、猴、牛。构建克隆胚原则和程序1、供体（donor）细胞的条件：1）取材选择取材方便，受外界条件（如紫外线，化学物质等）刺激相对较小，细胞活力相对较高的细胞作核供体；睾丸支持细胞、神经细胞、卵丘细胞、尾尖成纤维细胞、胎儿成纤维细胞、成熟B细胞和T细胞等均可作供体细胞。2）年龄年龄越小越好。目前世界多个国家建立了“细胞

8、银行”，收集、存放脐血干细胞及个人早期干细胞，如果患者本人存有细胞在“银行”中，则可取之作为核供体。3）获得供体细胞方法获取患者组织，按