DDR2参与类风湿性关节炎发病的分子机制研究

《DDR2参与类风湿性关节炎发病的分子机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、DDR2参与类风湿性关节炎发病的分子机制研究研究生：周洁学科专业：人体解剖与组织胚胎学所在单位：第四军医大学组织学与胚胎学教研室导师：张远强教授药立波教授资助基金项目国家重点基础研究发展规划(973)项目(19990756)国家重点基础研究专项经费资助(2002CB513000．07)关键词类风湿性关节炎DDR2MMP．13中国人民解放军第四军医大学2005年05月第四军医大学博士学位论文缩略语CIAAIADDRRABSACDNAEDTAECLRTKGAPDHHRPMHCTI～fPM～伊NCPAGEPBSPCRPMSFRTSDSTBS缩略词表

2、英文全称Collagen-inducedarthritismodelAdjuvant-inducedarthritismodelDiscoidindomainreceptorRheumatoidarthritisBovineSerUmalbuminComplementaryDNAEthylenediuminetetraacericacidEnhancedchemiluminescenceProteintyrosinekinaserecelDtorOlyceraldehydephosphatedehydroganaseHorseradishpe

3、mxidaseMajorhistocompatibili'cycomplex-TissueinhibitorofmetalloproteinaseMatrixmetalloproteinaseNitrocellulosePolyaerylamidegelelectrophoresisPho+'Inhatebu魄rsalinePolymerasechainreactionPhenylmethylsulfonylfluorideReversetranscriptionSodiumdodecylsulfateTfisbuffersaline中文名称

4、胶原诱导的关节炎模型佐剂诱导的关节炎模型盘状结构域受体类风湿性关节炎牛血清白蛋白互补DNA乙二胺四乙酸增强化学发光受体型酪氨酸蛋白激酶磷酸甘油醛脱氢酶辣根过氧化物酶主要组织相容性复合物基质金属蛋白酶抑制剂基质金属蛋白酶硝酸纤维素聚丙烯酰胺凝胶电泳磷酸盐缓冲液聚合酶链反应苯甲基磺酰氟反转录十二烷基硫酸钠tTis缓冲液———一茎堕呈垦奎堂堕主兰垡兰苎DDR2参与类风湿性关节炎发病的分子机制研究研究生周洁导师张远强教授药立波，教授第四军医大学组织学与胚胎学教研室{第四军医大学生物化学与分子生物学教研室中文摘要类风湿性关节炎(RA)是一种以攫性、对称

5、性多关节炎为主要临床表现的自身免疫性疾病。它的发病机制复杂，有多种细胞、细胞因子和蛋白酶类参与。DDR2是一类新发现的受体型蛋白酪氨酸激酶，它的胞外区的盘状结构域可以识别并结合胶原，在细胞的增殖、分化、侵袭和转移中具有重要作用。研究显示DDR2在类风湿性关节炎的滑膜细胞中高表达，并且可以上调滑膜细胞MMP．i表达。MMP-1是一种基质金属蛋白酶类，可以降解细胞外基质的多种成分，最终导致软骨、韧带及骨的破坏，在RA发病中占有重要的地位。在类风湿性关节炎发病机制中另外～种更为重要的基质金属蛋白酶为MMP．13。与MMP—l相比，它降解胶原、破坏软

6、骨的能力更强。DDR2是否可以通过调节MMP-13的表达参与类风湿性关节炎的发病目前尚无报道。研究DDR2对MMP-13表达的影响及其机制将有助于丰富对DDR2参与类风湿性关节炎发病机帝0的理解，为迸一步研究新的治疗手段奠定基础。研究目的：观察DDR2对MMP．13表达的调控作用，并进一步研究其调控机制。材料和方法：1．DDR2在小鼠类风湿性关节炎动物模型中的表达2第四军医大学博士学位论文1．1小鼠类风湿性关节炎动物模型的建立和鉴定选择8·10周龄雄性C57BL／6J小鼠为实验对象，分别给予鸡II型胶原(尾根部皮下注射)、mBSA+IL．1B

7、(分别为膝关节和足垫注射)、TNF．n／IL一1B(单独关节内注射)，诱导小鼠关节炎的发生。关节组织取材固定脱钙后以HE染色进行组织学观察及鉴定。1．2DDR2免疫组织化学染色利用免疫组织化学染色法观察类风湿性关节炎小鼠膝关节滑膜组织和软骨内DDR2的表达。2．DDR2野生型∞DR2)，突变体(m1)DR2)、截短体(ttDDR2)和自激活体伊eDDY)真核表达载体的构建及鉴定(1)Trizol法提取NIH3T3细胞总RNA，反转录为eDNA，PCR扩增DDR2的全长基因DDR2和截短体ttDDR2，克隆入测序载体pMDl8T，测序正确后亚克

8、隆入pcDNA3．1(+)，构建真核表达载体pcDNA3．1．DDR2一FLAG和pcDNA3．1-ttDDR2．FLAG，酶切鉴定；(2)分别以NIH3T3细胞和