茶树根际促生细菌的研究

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1、摘要植物根际微生物是植物根际微环境中的重要生物类群，对植物生长发育具有明显的影响，本研究利用选择性培养基，对不同茶园根际微生物进行了分离，研究了茶树根际细菌、真菌、放线菌的数量变化：运用选择性培养基对根际固氮、解磷和解钾细菌进行了筛选，运用生物学方法对具产植物激索潜能的促生细菌和植物病原真菌拮抗细菌进行了筛选，对细菌分离物进行了鉴定；对一株植物病原真菌拮抗细菌的抗菌物质进行了分离、纯化并研究了其部分理化性质。主要结果如下。1土壤肥沃的茶园根际细菌的数量最大，土壤贫瘠的茶园数量最小；相同土壤肥力的茶园，10年生茶园根际细菌的数量最大，4年生的次之，20年生的最小；根际真菌的数量，土壤肥沃茶

2、园的较小，中等和贫瘠茶园的较大。根际放线菌的数量，20年生茶园的明显高于4年和10年生茶园的，而且，土壤贫瘠茶园的数量较大。相同肥力的土壤中，固氮菌的数量随茶龄的增加而减少，但减少的幅度以贫瘠土壤最大；解磷和解钾细菌也显示了随茶龄的增加数量减少的趋势，但肥沃土壤中，茶树达到10年时减少的幅度不明显，20年生茶树急剧减少；中等和贫瘠土壤中茶龄达到10时便明显减少。相同茶龄的土壤中固氮菌的数量随土壤肥力的降低而减少；在4年生茶园里，解磷和解钾细菌的数量与土壤肥力关系不大：在10年生茶园里，随肥力的降低而减少；在20年生茶园里，随土壤肥力降低而有所增加。2从茶树根际中获得产植物激素纯化细菌分离

3、物3个，固氮细菌纯化分离物10个，解磷细菌纯化分离物8个，解钾细菌纯化分离物2个，筛选获得对多种植物病原真菌具有较强拮抗作用的细菌1株。3对分离的茶树根际促生细菌经培养特征观察、生理生化指标测定，鉴定结果为编号N42、N50、N80、N119的分离物属于拜叶林克氏菌属IV(Beijerinckia)，N46、N49的分离物属于氮单胞菌属(Azomonas)，N107、N152的分离物属于黄色杆菌属(Xanthobacter)，N120、N115的分离物属于固氮菌属(Azotobacter)：P54、P121、P126、P129的分离物属于假单胞菌属(Pseudomonas)，P38、P5

4、5、P124、P127、K44、K46的分离物属于芽孢杆菌属(Bacillus)，PG7的分离物属于假单胞菌属(Pseudomonas)，PG20的分离物属于土壤杆菌(Agrobacterium)，编号PG36的分离物属于芽孢杆菌属(Bacillus)；A95的拮抗细菌经培养特征观察、生理生化指标测定、16SrDNA碱基序列测定和同源性分析，鉴定其为圆孢芽孢杆菌(Bacillusglobisporus)，定名为BacillusglobisporusA95，GENEBANK注册号为AY292989。4Bacillusgtob卸o,-usA95菌株发酵液经硫酸铵沉淀、SephadexG-10

5、0柱层析、DEAE—SepharoseFastFlow柱层析、SephadexG一50层析、真空冷冻干燥，获得纯化抗菌蛋白，经SDS—PAGE测定其分子量为40．7KD，经稳定性检测表明该蛋白在100℃条件下煮沸55rain仍具有拮抗活性，对胰蛋白酶、蛋白酶K不敏感，对氯仿较敏感，对于较大范围的pH值变化不敏感。关键词：茶；根际微生物；根际促生细菌；抗菌蛋白；纯化VStudiesOHPlantGrowth-PromotingRhizobaeteriaofTeaRhizosphereSUNhaixin(ForestryCollege，ShandongAgricultureUniversit

6、y)AbstraetRhizospheremicrobesisanimportantbiologicalgroupinrhizospheremicro—ecologywhichgreatlyimpactedonplantgrowth．Inthisstudy,rhizospheremicrobeswereisolatedthroughselectivemediura，quantityanalysisofrhizospherebacteria,fungi，actinomyeesindifferentteaplantationwereconducted．Azotobacter,Phosphob

7、acteriaandBacillusmucilaginosuswereselectedthroughselectivemedium．SomePlantGrowth—PromotingRhizobacteriaoftearhizospherewereselectedbybiologicalmethodandwereidentifiedfurther,whichweresupposedtobewiththepotentialofsecr