培养基的灭菌

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1、玻璃器皿的洗涤和包装玻璃器皿的洗涤和包装1.玻璃器皿的洗刷：玻璃器皿的使用前必须洗刷干净。锥形瓶、试管、培养皿等浸入水中洗涤，用毛刷和洗衣粉洗刷，然后再用水冲净。移液管先用洗液浸泡，再用水冲洗。洗刷干净的玻璃仪器在电热干燥箱中烘干后备用。2.玻璃器皿灭菌前的准备工作：（1）培养皿又称双碟或平皿，由一底一盖组成一套。可以每套单独使用纸包装，也可将几套一起用纸包装；（2）移液管应在距管口约1-2毫米处用铁丝塞入少许棉花（约1-1.5厘米长）；以防止细菌吸入口中，并避免将口中细菌吹入管内。棉花要塞的松紧适宜。炊时以能通气但不使棉花滑下为准。塞好棉花的移液管尖端，放在

2、4-5厘米宽的长条纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，右手将移液管压紧，在桌上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。3.棉塞的制作为了过滤空气，避免污染，试管或锥形瓶口需用棉花堵塞（脱脂棉易吸水，勿用）。为了节省棉花或节省时间，在配置实验临时所用的无菌水和培养基时，也可以用金属试管帽代替棉塞。装液体培养基的锥形瓶口，可包扎6-8层纱布以代替棉花。制作棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的圆孔上，用右手食指将棉花从中央压入圆孔中制成棉塞，然后直接压入试管或锥形瓶口。也可借用玻璃棒塞

3、入，也可以用折叠卷塞法制作棉塞（见图2-2）。制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙，以防外界微生物沿缝隙浸入。棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提棉塞，以瓶、管不下落为准。图2-2棉塞的制作过程实验培养基的制备与灭菌棉塞的2/3应在管内，上端露出1/3，便于提拔。如制作时不慎沾上培养基，则不可再用。在棉塞和平口外要包以厚纸，或将塞好后的试管集中放在铁丝筐内，上面盖以厚纸，用线绳扎好，准备灭菌，避免灭菌后冷水淋湿棉塞，并防止接种前培养基水分散失。上面配制好的各种培养基，分装于锥形瓶内和试管中，分别加以捆扎，做好标记。然后灭菌备用。一、实验目的1.了解培养基的配制原理，掌握

4、常用培养基的制备方法；2.学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。二、基本原理培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。任何培养基中均需含有微生物所必需的能源、碳源、氮源、矿质元素、水和生长因素，但不同营养类型、不同种类的微生物对营养元素的要求又有很大差异。不同微生物对PH值要求不一样，应将培养基调到一定的PH值范围。根据研究目的的不同，可将培养基制成固体、半固体和液体三种形式。固体培养基是在液体培养基中加入1.52.0%的琼脂作凝固剂，半固体培养基则加入0.5-0.8%的琼脂。有时为了特殊的目的，也可用明胶或硅胶等作为凝固剂。由于微生物营养

5、类型不同，应提供不同种类的培养基。在分离、培养异养微生物时，对一般细菌常选用牛肉膏蛋白胨培养基，对放线菌常用高氏合成I号培养基，培养酵母菌、霉菌则用麦芽汁或豆芽汁葡萄糖培养基。三、实验器材1.药品：牛肉膏；蛋白胨；氯化钠；琼脂；2.仪器及其他：试管；移液管；锥形瓶；烧杯；量筒；玻璃棒；漏斗；纱布；棉花；报纸；天平或台秤；等。四、实验内容（一）常用培养基的配制1.肉膏蛋白胨培养基（用于分离及培养细菌）成分：牛肉膏0.5g；蛋白胨1.0g；氯化钠0.5g；琼脂1.5－2.0g；水100mL；PH7.0－7.21、配制培养基的基本过程如下：（1）称量：按照培养基配方

6、，正确称取各种原料放于烧杯中；（2）溶解：在上述烧杯中加入所需水量（根据实验需要可加入蒸馏水或自来水）搅匀，加热溶解。应在药品全部溶解后加水补足加热过程所蒸发的水分。配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至琼脂完全融化，并不断搅拌，以免糊底烧焦，最后加水补足失去的水分；（3）调PH值：用1NNaOH或1NHCl调PH至7.2，尽量避免回调；（4）分装、包扎灭菌注意：（1）牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放人热水中，牛肉膏便与称量纸分离，立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮，故称量时

7、要迅速（2）配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至琼脂完全融化，并不断搅拌，以免糊底烧焦，最后加水补足失去的水分；或者将琼脂单独溶解再加入到已配好的培养基中（3）调pH检测培养基的pH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。pH的调节通常放在加琼脂之前。应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度2.斜面培养基制作法将已灭菌的装有琼脂培养基的试管，趁热置使成适当斜度，凝固后即成斜面（图2-3）。制得的斜面以稍有凝结水析出者为佳。如果制作半固体或固体深层培养基时，灭菌后则应垂直放置至冷凝。灭菌

8、后的培养基，一般需进行无菌检查。最好从