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时间:2019-05-14
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1、生物信息的传递(上)—从DNA到RNA基因表达:是基因经过转录、翻译、产生有生物活性的蛋白质的整个过程。转录(transcription):以DNA为模板,按照碱基互补原则合成一条单链RNA,从而将DNA中的遗传信息转移到RNA中去的过程称为转录。编码链(codingstrand)=有意义链模板链(templatestrand)=反义链不对称转录(asymmetrictranscription):转录仅发生在DNA的一条链上。启动子(promoter):是DNA转录起始信号的一段序列,它能指导全酶与模板正确的结合,并活化酶使之具有起始特异性转录形式。终止子(te
2、rminator):转录终止的信号,其作用是在DNA模板特异位置处终止RNA的合成。转录单位:DNA链上从启动子直到终止子为止的长度称为一个转录单位。3.1RNA的转录转录的基本过程都包括:模板识别、转录起始、通过启动子及转录的延伸和终止。1、模板识别阶段主要指RNA聚合酶与启动子DNA双链相互作用并与之相结合的过程。转录起始前,启动子附近的DNA双链分开形成转录泡以促使底物核糖核苷酸与模板DNA的碱基配对。2、转录起始就是RNA链上第一个核苷酸键的产生。3、转录起始后直到形成9个核苷酸短链是通过启动子阶段,通过启动子的时间越短,该基因转录起始的频率也越高。4、
3、RNA聚合酶离开启动子,沿DNA链移动并使新生RNA链不断伸长的过程就是转录的延伸。5、当RNA链延伸到转录终止位点时,RNA聚合酶不再形成新的磷酸二酯键,RNA-DNA杂合物分离,这就是转录的终止。3.1.1转录的基本过程RNA合成的基本特点:1.底物是:ATP、GTP、CTP、UTP2.在聚合酶作用下形成磷酸酯键3.RNA的碱基顺序由DNA的顺序决定4.仅以一条DNA链作为模板5.合成方向为5’→3’6.合成中不需要引物3.1.2转录机器的主要成分原核生物RNA聚合酶:亚基基因相对分子量亚基数组分功能αrpoA3.65×1042核心酶核心酶组装,启动子识别β
4、rpoB1.51×1051核心酶β和β’共同形成RNA合成的活性中心β’rpoC1.55×1051核心酶 ?11×1041核心酶未知σrpoD7.0×1041σ因子存在多种σ因子,用于识别不同的启动子1、RNA聚合酶大多数原核生物RNA聚合酶的组成是相同的,大肠杆菌RNA聚合酶由2个α亚基、一个β亚基、一个β’亚基和一个ω亚基组成,称为核心酶。加上一个σ亚基后则成为聚合酶全酶(holoenzyme),相对分子质量为4.65×105。研究发现,由β和β’亚基组成了聚合酶的催化中心,它们在序列上与真核生物RNA聚合酶的两个大亚基有同源性。β亚基能与模板DNA、新生R
5、NA链及核苷酸底物相结合。σ因子可以极大地提高RNA聚合酶对启动子区DNA序列的亲和力,加入σ因子以后,RNA聚合酶全酶识别启动子序列的特异性总共提高了107倍。σ因子的作用是负责模板链的选择和转录的起始,转录的起始从化学过程来看是单个核苷酸与开链启动子-酶复合物相结合构成新生RNA的5’端,再以磷酸二酯键的形式与第二个核苷酸相结合,起始的终止反映在σ因子的释放。过去认为二核苷酸的形成就是转录起始的终止,实际上,只有当新生RNA链达到6-9个核苷酸时才能形成稳定的酶-DNA-RNA三元复合物,才释放σ因子,转录进入延伸期。真核生物RNA聚合酶真核生物中共有3类R
6、NA聚合酶。真核生物RNA聚合酶一般有8-14个亚基所组成,相对分子质量超过5×105。除了细胞核中的RNA聚合酶之外,真核生物线粒体和叶绿体中还存在着不同的RNA聚合酶。线粒体RNA聚合酶只有一条多肽链,相对分子质量小于7×104,是已知最小的RNA聚合酶之一,与T7噬菌体RNA聚合酶有同源性。叶绿体RNA聚合酶比较大,结构上与细菌中的聚合酶相似,由多个亚基组成,部分亚基由叶绿体基因组编码。线粒体和叶绿体RNA聚合酶活性不受α-鹅膏覃碱所抑制。常用的转录抑制剂及其作用:抑制剂靶酶抑制作用利福霉素细菌的全酶与β亚基结合,阻止起始链霉溶菌素细菌的核心酶与β亚基结合
7、,阻止延长放线菌素D真核RNA聚合酶Ⅰ与DNA结合,并阻止延长α-鹅膏蕈碱真核RNA聚合酶Ⅱ与RNA聚合酶Ⅱ结合起始复合物的形成转录可被分为4个阶段,即启动子的选择、转录起始、RNA链的延伸和终止。原核生物中:启动子选择阶段包括RNA聚合酶全酶对启动子的识别,聚合酶与启动子可逆性结合形成封闭复合物(closedcomplex)。真核生物RNA聚合酶Ⅱ所形成的转录起始复合物:除了RNA聚合酶之外,真核生物转录起始过程中至少还需要7种辅助因子参与一般情况下,该复合物可以进入两条不同的反应途径,一是合成并释放2-9个核苷酸的短RNA转录物,即所谓的流产式起始;二是尽快
8、释放σ亚基,转录起始复合
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