分支链DNA信号放大技术及其在临床医学中的研究应用

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1、。180‘1l}界J》+瘟圭2010年第9卷第3-4期WorldJournalofTumorVolume9，Number3-4．Dec2010文章编号：1683—0342(2010)03-0180．03术综述术分支链DNA信号放大技术及其在临床医学中的研究应用娄晓丽综述，侯彦强审校摘要：分支链DNA信号放大技术(bDNA)是一种基于探针杂交信号放大的检测系统，无需对mRNA纯化和反转录即可对mRNA做精确的定量检测，有灵敏度高、线性范围宽、准确性好和结果稳定可靠等优点，具有良好的临床科研应用价值。本文就bDNA技术的原理及其在CMV、HBV、HCV和HI

2、V等病毒定量检测、基因表达分析以及肿瘤基因分析等方面的应用作一介绍。关键词：分支DNA(bDNA)；基因；应用中图分类号：R．331文献标识码：AThebranchedDNAtechnologyanditsapplicationsinclinicalmedicineLOUXiao—li，HOUYan—qiang(DepartmentofCenterLaboratory,Son~iangHospitalAfiliatedFirstPeople"sHospitalShanghaiJiao而馏Univemi~shanghai201600,ChmAbstract

3、：ThebranchedDNA(bDNA)technologyisanovelnucleicacidhybridmationassaythatprovidesanuniqueapproachforgenequantitativewithoutmRNApurificationandRT-PCRamplification，bDNAtechnologyismoresensitive，effectiveandreliablethanothergenequantitativemethods．WedescribeherethemechanismofbDNAtechn

4、ologyanditsapplicationsinthedetectionofviruses(CMV,HBV,HCVandHIV)，analysisofgeneexpressionandtumorgenemarkers．Keywords：bDNAtechnology；gene；application分支链DNA信号放大技术(branced．DNA，探针(1abeledextender,LE)与一端与靶序列结合后，bDNA)是Chiron公司推出的一种不依赖PCR扩增另一端再连接bDNA放大分子(BranchedDNA的核酸杂交信号放大检测技术，该技术克服

5、了传统amplifer)。bDNA上有许许多多位点，可与十几个的real—PCR技术中的缺陷与不确定因素，无需抽提到几十个酶标探针结合，这样就可以把杂交信号放纯化RNA，无需反转录，无需PCR扩增，只要将大很多倍。第一代bDNA技术LE探针直接连接样本用特定裂解液裂解后，经探针杂交与信号放大bDNA放大分子，该分子上连接有碱性磷酸酶探针。后即可迅速得到基因定量结果。本文就bDNA技术DKern等⋯对此改进形成了第二代bDNA探针技的原理及其在CMV、HBV、HCV和HIV等病毒定术，即在标记辅助探针上先接前置放大探针量检测、基因表达分析以及肿瘤基因分析等

6、方面的(pre。ampliferprobe)，前置放大探针上连接了很多应用作简要介绍。bDNA放大分子，这样能够进一步扩大检测信号(如图1)【2J，通过两次放大，信号更强，敏感性更高，1分支链DNA信号放大技术可检出下限为500个分子，比第一代灵敏度提高了首先将捕获探针(captureprobe，CP)固化在微20倍，对HIV的下限可以达390拷贝／毫升。孔板上，捕获辅助探针(captureextender,CE)一端由于bDNA检测技术会有非特异性杂交信号与靶序列结合，另一端与捕获探针结合。标记辅助(non—specifichybridization，

7、NSH)，其应用受到限收稿日期：2010．08—30：修回日期：2010—09—30制，MarkL．Collins等在设计标记辅助探针、前置作者单位：上海交通大学附属第一人民医院松江分院中心实验室，上海201600放大探针、bDNA放大分子和碱性磷酸酶标记探针作者简介：娄晓丽(1982一)，女(汉族)，山东烟台人，硕士学位，检时，加入了30％的5一甲基2双脱氧异胞嘧啶核苷验师．主要研究方向：肿瘤基础研究及实验室诊断。(isoC)和5一甲基一2一双脱氧鸟嘌呤核苷(isoG)，这通讯作者：侯彦强(1971．)，男(汉族)，山东泰安市人：博士学位，两种碱基是由

8、人工合成，不与4种自然碱基(A、T、副主任检验师，科主任，系《世界肿瘤杂志》、《