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时间:2019-05-10
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1、RNA复制1.RNA是怎样从DNA模板(DNAtemplates)转录而来的(transcription)?2.新合成的RNA是怎样变成具有生物功能的RNA链的?3.RNA和DNA是怎样利用RNA作为模板转录而来的(反转录reversetranscription);4.RNA结构与功能的复杂性暗示着什么?1.RNA分子在结构与功能上具有很大的多样性RNA分子具有与蛋白质分子一样的复杂性与独特性.作为DNA与多肽之间的信使(mRNA),作为适配器使特殊的氨基酸与其在mRNA上的特殊的基因编码相对应(tRNA),作为蛋白质合成场所
2、的核糖体中的结构与催化成分(rRNA).在RNA病毒中起着保存其遗传基因的作用。催化最初的RNA产物的合成.在进化史上可能比DNA更早出现。2.DNA与RNA在某些方面很相似,但是在其他方面则不同在一些合成的基本机制上很相象:合成都需要模板的引导;在链的伸展上有同样的极性(5`to3`);合成都需要三磷酸核苷(dNTPorNTP).不同的地方:RNA的合成不需要引物的存在(primers);只涉及到一个大的DNA分子中的一小部分;只使用两个DNA链中的一条作为模板;不存在校正的问题;起始变化很大(合成起始的时间、地点、效率变化
3、非常大)3.在E.coli中的RNA聚合酶有多种功能全酶包含五个亚基(a2bb’s)被用来合成E.coli中的所有RNA.功能包括:寻找DNA链上的合成起始位点并解开一小段DNA的双螺旋——起始(initiation);选择正确的NTP并催化磷酸酯键的形成——延长(elongation);侦测RNA合成的终止信号——终止(termination).4.RNA的合成发生在DNA模板上的一个“移动”的转录“泡”中在转录过程中,只存在着一小段的DNA-RNA杂合体(在细菌中为8bpinbacteria).在E.coli中,每次有大
4、约17bpDNA双螺旋在转录泡中被解开.E.coliRNA聚合酶催化的RNA链以50-90nucleotides/second的速度延长.5.RNA聚合酶通过识别DNA链上的启动序列(启动子)来启动转录启动子序列同基因靠的很近.通过“蛋白质结合法”可以确定启动子的序列——足迹法(e.g.,footprintingtechniques).启动子虽然都可以和聚合酶结合,但是它们的序列却是千差万别的,不过,在–10和–35位置却都有相同的序列.通过定位突变技术可以发现,启动子同保留序列越相近,则效率越高.Alignmentofdif
5、ferentpromotersequencesfromE.coligenes:the–10(thePribnowbox)and–35consensusregionwererevealed.SequencesofthecodingDNAstrandisconventionallyshownAddTTTACCN12TATAATN7APresentonlyincertainhighlyexpressedgenes6.s亚基使E.coliRNA聚合酶能够辨认出特殊的启动子序列没有s亚基的RNA聚合酶(i.e.,thea2bb’)不能
6、在启动子的位置启动RNA的合成.s亚基可以降低RNA聚合酶与DNA链上的普通的基因链的结合.StandardHeat-shockNitrogenstarvations70forstandardpromoters;s32forheat-shockpromoters;s54fornitrogen-starvationpromotersE.colicontainsmultiplesfactorsforrecognizingdifferenttypesofpromoters:7.RNA聚合酶将模板DNA解螺旋,然后开始合成RNA聚合酶
7、首先移动到“启动子”区域,并形成一个紧密结合的复合体.然后在这个区域中大约12-15bp长的链解螺旋,这个部分包括了从AT-rich–10siteto+3的位点.8.在DNA上的特殊的被称为终止子的序列上E.coliRNA聚合酶停止合成RNA在细菌中已经鉴定出两种终止子:一种依赖于r(rho)蛋白,另一种则不依赖.在r不依赖终止区,转录出来的RNA可以形成发夹结构,而且在终点结束前还有一系列U核苷酸(AinDNA).r-依赖终止子需要r蛋白——具有ATP-依赖的RNA-DNA解螺旋酶活性,可以终止RNA的合成Ther-依赖终止
8、子在序列上并不表现出具有特殊的相似性,尽管它们也有回文序列是新合成的RNA上的信号,而不是DNA的信号使得RNA合成终止r-independentterminator:amodelPalindromeDNAsequencesOligoUsStem-loop(hairpin)s
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