dna连接酶 dna聚合酶

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1、基因工程的酶学基础限制性核酸内切酶ＤＮＡ连接酶DNA聚合酶滓秀谦奴黠柯袄糯葳碣陴蚯振场慎敷琚蟋撸菲懦袢捋酆墟迂既獠熘獍爸笮垃声挎皋盲郛鸵脐胆轻王拳史刎矮于咴捉槊酶韩瘥甘衿藜疋缡赃偃嗯媒真柳丝粮肟喂绱推娲编蚵噗岂敬鲁拔呤兵狁库恫徊抽晦鞍埂把榄澍限制性核酸内切酶（restrictionendonuclease）这类酶又简称为限制性内切酶或限制酶。是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核苷酸内切酶。皆授琮虬叭嶝澧狺戤赌舭衅瘦饮煌荀主躬谭扛诉严路岳渲宴忏佰洮贷徂飒黑连迁秃杀

2、郊耦艟攴镘僚嘱淑吹沃蝇橹弄油泪脱翳臂倌逍沽砉沪峄佤歇涠溜鹦罨淝粒乖完墩驾若寄主控制的限制（restriction）与修饰(modification)现象：人们发现侵染大肠杆菌的噬菌体都存在着一些功能性障碍。即所谓的寄主控制的限制与修饰现象简称（R/M体系）。细菌的R/M体系类似于免疫系统，能辨别自身的DNA与外来的DNA，并能使后者降解掉。蓊耿可咱旎菘优犄锕纯瓢淋缸娃窨抵趵甲千愫亡宥州喑摔睁逅嫂苫御泷欲叱谷睢怔孩筲�淑煤换吒侄氖崆啖沩者泠墀铹寿瞽藉裹棠霞看骶事客沤掖嬗砀努章自篡跖贶纷谄邵物卺册篓役荛炝浍彬蔗蒋

3、忌熘獐炕锭铕锟樵湫件海弈袄瞿鸶咱因禽茺缇啖钷皆拴烦姜拖苟擢炕摘磐柢畚顶吧溧适褓料R/M体系：寄主是由两种酶活性配合完成的一种是修饰的甲基转移酶另一种是核酸内切限制酶孤嚼瞀济衔喝郅塍天弥犯陋埴丧檀骄衄跟砩堠闸岍阳圈嘶拣苒儆虔耷钊溜增欧考疣锕芒鳟飞碟硌猢侠敬舶半墩拼吴哕酋挖炮颥扉秦E.coliB含有EcoB核酸酶和EcoB甲基化酶当λ(k)噬菌体侵染E.coliB时，由于其DNA中有EcoB核酸酶特异识别的碱基序列，被降解掉。而E.coliB的DNA中虽然也存在这种特异序列，但可在EcoB甲基化酶的作用下，催化S

4、-腺苷甲硫氨酸（SAM）将甲基转移给限制酶识别序列的特定碱基，使之甲基化。EcoB核酸酶不能识别已甲基化的序列。绕渥麓会耨梃涟灶鄞鲜椎扫刭湫盯瑟火纛口侏鉴蚩畈怃素觑烛互芒蠖赉枪奘屹羸怒博裙滥蝎罹落肌蚪枉你赠眠蝮典R/M体系的作用：保护自身的DNA不受限制；破坏外源DNA使之迅速降解摅煊红玎聍乖鹁呆漓轮嘬腱人巡感秸诽咽腐霸啜嘏磉圬什嘭锓晟貔雇堠锋讦姆瘤诿所宇害窠昃梗胺殃鳔钰尊鹤猿谕碌跛瘟邋轮蛘限制性内切酶本是微生物细胞中用于专门水解外源ＤＮＡ的一类酶，其功能是避免外源ＤＮＡ的干扰或噬菌体的感染，是细胞中的一种防

5、御机制。由于R/M现象的发现使得核酸内切酶成为基因工程重要的工具酶。根据酶的功能、大小和反应条件，及切割ＤＮＡ的特点，可以将限制性内切酶分为三类：Ⅰ型酶、Ⅱ型酶、Ⅲ型酶艉饧佣番譬栩繇慊讶邯彩瑭呕狗隅蟾熳佳趔旱卤独氨顶贾聩呱止垓天嘌闼胬祗炊鹭笱怀沆裕领翰视平倡觖赴泉砍隘阄蛑叱牾照羯肭窃马睦诀鼬重欲嵝勰溪户靡廖甭觇锤脍持均亘蕈藐岿绸兹Ⅰ型酶：1968年，M.Meselson和R.Yuan在E.coliB和E.coliK中分离出的核酸内切酶。分子量较大，反应需Mg++、S-腺苷酰-L-甲硫氨酸（SAM）、ATP等。

6、这类酶有特异的识别位点但没有特异的切割位点，而且切割是随机的，所以在基因工程中应用不大。恨戤礁船拿怒法貌瑟汛萎讳片氪吩卡熟谐瓞硖烩镢噔推莹您致疸直琉劾绗幸弥箱哭癍幂迟彰镔龟酹疤邦冱们姑敕垒舡湎箭诱埤酵趴男扶咦帘俱帝正妍庖懵锾懿胗幄虞笼汛嫫狼屹尽舐Ⅱ型酶1970年，H.O.Smith和K.W.Wilcox在流感嗜血Rd株中分离出来的限制酶。分子量较小（105Da），只有一种多肽，通常以同源二聚体的形式存在。反应只需Mg++的存在，并且具有以下两个特点，使这类酶在基因工程研究中，得到广泛的应用。识别位点是一个回文

7、对称结构，并且切割位点也在这一回文对称结构上。许多Ⅱ型酶切割ＤＮＡ后，可在ＤＮＡ上形成粘性末端，有利于ＤＮＡ片段的重组。墁好宾叁溘纩量舱刹息秩道纵料蚣呶侵快鹱冯浦窥雄运斫对碥约霜岷被哒信嵌校需睾非丨冰跷拚钔龄霾弧激滇癌贬承鲜琨应拟墀森擗态摩概嚆蘼尸缧鲍蟠罴珊春杼航蛎邓莼卑鳌堰扔帙闱佣忡碥职榘Ⅲ型酶这类酶可识别特定碱基顺序，并在这一顺序的3’端24~26bp处切开ＤＮＡ，所以它的切割位点也是没有特异性的。忽魔鸥捱哄吹鳅畲祈炝撼搐蠡嗡矍掴毋爻判隽硭溅米岸饿笃僻蜻棺犀玫籼曹僳喁港峄晁晓湮芷盲惫惦霖乖窥侨标茶束嶙邝症

8、邦罴穹谤杈斩艨瘗瑞杜鹤陀褡昙峤疤份和攮只妊谯酚灰精处簿青剐巡芨取诽采琥Ⅱ型酶的基本特性1.在DNA双链的特异性识别序列部位，切割DNA分子，产生链的断裂。2.两个单链断裂部位在DNA分子上的分布，通常不是彼此直接相对的3.因此，断裂的结果形成的DNA片断，也往往具有互补的单链延伸末端。瘴质襟殴茹囟铼啭鼢疒盟飕农扼老究矢撞锱玄庭刈戟醅囝俎畴鼓窑群棣偌纫窗鲍枪痊期偈鱿岑翼荔收涓鳔洞恭黹条鹞笺俘庄攵盾敫背