基于vasadnd基因标记的两种海水鱼原始生殖细胞发生发育的研究

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1、．Studyonspecificationanddevelopmentoftheprimordial．．．germcellsintwomarinefishspeciesbyvasa／dndgene．ByFanLinADissertation／ThesisSubmittedtoTheUniversityofChineseAcademyofSciencesInpartialfulfillmentoftherequirementForthedegreeofDoctorofAgricultureInstitu

2、teofOceanology,ChineseAcademyofSciencesApril，2013原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任人由本人承担。论文作者签名：日期：≯形、乡．形学位论文版权使用授权书本人完全了解中国科学院海洋研究所有关保留、使用学位论文的规定，同意海洋研究所保留并向国家

3、有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权中国科学院海洋研究所可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编本学位论文。(保密论文在解密后适用本授权书)论文作者签字：导师签字：签字日期：矽BoV埸签字日期．力／；t椤林帆致谢博士学位论文致谢子日：“逝者如斯夫，不舍昼夜。”转眼之间，硕博连读的五年时光一闪而过。回首自己的求学生涯，也已经二十个春秋。在白驹过隙般的时光交错中，充实写满了我的求学生活。既有成功的喜悦，亦有

4、失败的沮丧。悲喜之间，苦乐之中，我不断学习成长。在博士论文完成之际，感恩之情溢于言表，谨以此文，感谢所有曾经无私帮助过我的人。师者，传道授业解惑也。首先我要感谢恩师李军研究员对我的谆谆教诲与悉心关怀，我的每一分进步都离不开恩师的辛勤栽培。恩师渊博的专业知识，前沿的思维，广阔的研究视野，严谨的治学风格，积极进取的精神让我受益匪浅。恩师在实验选题、设计实验实施和论文撰写过程中给予了悉心指导和帮助，使得论文顺利完成。恩师性格谦和，为人正派，有海纳百JJI的气度，让我领悟到了“学高为师，身正为范”的真谛。道虽

5、迩，不行不至；事虽小，不为不成。衷心感谢刘清华师姐用实际行动教会我这样的道理。师姐不仅在实验上给予了悉心指导，在文章撰写和发表过程中提供很多帮助，其中不乏金玉良言，亦有点睛之笔，为我的文章增色不少：在生活中亦是我的良师益友，给我提供了无微不至的关怀和帮助。感谢徐世宏、肖志忠和马道远老师在实验材料采集上的指点和大力帮助，使实验得以顺利进行。感谢师姐隋娟、佟雪红博士及师兄何滔博士对我的支持和鼓励。感谢迟良博士、师妹赵春彦、柳意樊、师弟郑君飘、张雪雷让原本枯燥的实验生活充满了乐趣，让我度过难忘的科研时光。感

6、谢新加坡国立大学洪云汉教授提供宝贵的出国学习机会，让我开阔了科研思维，拓展了发展空间。感谢李振东、李名友及洪旎博士对实验技术的指导，使我在科研的道路上少走了很多弯路，并顺利完成了文章的发表。君子之交淡如水。感谢好友王经攀、陈继业、何庆国、林勇新、何梅琳的帮助和鼓励，让生活更加纯净和温暖。感谢爱人张晓红的默默支持与鼓励，让我的失意得以安慰，快乐得以分享，在迎接挑战的时候则充满了力量!感谢父母二十多年的养育之恩，谁言寸草心，报得三春晖!I林帆基于vasa／dnd基因标记的两种海水鱼原始生殖细胞发生发育研究

7、博士学位论文基于vasa／dnd基因标记的两种海水鱼原始生殖细胞发生发育的研究导师：李军研究员(中国科学院海洋研究所，青岛266071)摘要原始生殖细胞(PGCs)是生殖细胞的祖先，具有分化成两性配子的潜能。原始生殖细胞的发生发育的研究对于种质资源保存及繁殖育种都具有重要的意义。然而目前鱼类PGCs相关的研究仍局限于模式及少数淡水鱼类，缺乏海水鱼PGCs的相关研究报道。大菱鲆(Scophthalmusmaximus)、真鲷(Pagrusmajor)是我国重要经济海水养殖品种。然而近年来出现了种质资源退

8、化，病害不断增多，养殖效益下降的趋势，因此种质资源保护的要求也日益突出。本研究通过克隆大菱鲆vasa／dn硅因，分析其在生殖系细胞发生发育过程中的表达特性和功能，进而揭示了大菱鲆PGCs的起源迁移模式；同时以真鲷作为海水鱼的代表，研究vasa在其配子形成及胚胎发育中的表达特征，进一步克隆Tvasa转录调控序列并在模式鱼中通过RNA定点表达和转基因技术研究其对生殖细胞的标记功能。本研究为这两种经济鱼类生殖细胞发生发育规律提供了理论基础，并为海水鱼生殖系细胞