食用担子菌5898菌的生物学特性和抗真菌作用研究

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1、贵州大学硕士学位论文食用担子菌5898菌的生物学特性和抗真菌作用研究姓名：周礼红申请学位级别：硕士专业：微生物学指导教师：梁宗琦;刘爱英20000501摘要食用担子菌5898菌(以下简称5898)冬孢子无休眠期，条件适宜即可萌发，在马铃薯葡萄糖固液培养基上有两种萌发方式：担孢子萌发和无性孢子萌发。5898营养菌丝在PDA培养基上梭状，一般1～5(～17)个隔，于分隔处可产生1～2级分支：其上芽生小孢子，尖锐或略微钝圆，1．5～5．2(～6．0)X(165～)18．O～1800(～2250)um。这些形态特征与冬孢子在PDA液体中萌发形成的

2、菌丝形态完全一致，从而确证了梭状短菌丝、长苗丝是5898菌的营养体。5898一般能形成两种无性孢子(芽孢子和无性孢子u)．而且在多种人工培养塾上能形成与自然冬孢子形态基本相同的厚垣孢子，从而完成其生活史。通常液体培养基的萌发率高于阎体培养基。且吲体萌发以担孢子方式为主．液体萌发以无性孢子方式占优势．能形成灰白色的茁膜。iijj萄糖和蔗糖易诱导担孢子萌发．麦芽糖则有利于无性孢子的萌发。萌发最适pH是5．且中性及中性偏酸对担孢子萌发有利，酸性、碱性、偏碱性有利于无性孢子萌发。萌发模式稳定。分离自不同产地的11个菌株依其培养性状，可归纳为四个基

3、本类型。其代表菌株分别为5898—7、5898—3、5898—5、5898一s。以Aspergillusniger为指示苗，滤纸片法测定．结果显示：发6}带苗原液的活性最慢，浓缩20倍的菌体乙醇一水提取液活性最低．浓缩20倍的菌体水提液的活性与非带菌原液的相同。50％及50％以上浓度的丙酮及90％及90％以上浓度的乙醇能将活性纽分完全沉淀。活性物质分子量小于12，00014．000Da。粗提物(以下简称5898一YE)乳白色至浅黄色，粉末状，对热、两种蛋白酶相当稳定：对紫外光、有机溶剂较稳定。5898菌对2株人体瘸原真菌，Cryptoco

4、ccusneoformans、Candidaalbicans：3株植物病原真菌．Trochoderma、小麦全蚀菌、西瓜尖孢镰刀菌；8株烟叶霉菌，爿,flavus、penicilliumsp．等；13株食品霉菌，Penicilliumcitrinum和Aspergillussp．及4株空气污染真菌，AⅢiger、Paecilomycessp．等均有较强的抑制作用。被抑制的黑衄霉菌丝畸形膨大，分支增多：对新型隐球菌有溶菌作用。5898—YE随无性孢子U的形成而产生，其活性随无性孢子u数量的增加而增强。二者在时序上表现出了明显的相关性。589

5、8最适生长温度20℃，最适合成抗真菌活性物质的温度25℃。光照对5898菌的生长、次生代谢物的合成以及菌丝球的形成无明显的影响。最佳生长碳氮源是麦芽糖，其次是棉秆糖：合成5898一YE的最佳碳源是可溶性淀粉，其次是马铃薯淀粉。最佳生长氮源是蛋白胨，其次是NaNO，：合成5898一YE的最佳氮源是干酪素。最适生长pH是8，合成5898一YE的最适口H是4。最适接种量为5％。根据以上结果设计正交试验，最后得出5898发酵工艺条件配置的初步方案：(1)培养基配方：可溶性淀粉lg：NH。NO，0．39，干酪素1．59；pH8：麦芽汁lOOml：(

6、2)培养方法：培养液装量为摇瓶容积的1／5，振荡培养(摇床转速为120～140r／min振幅为2．5cm)(3)接种量：5％：(4)培养温度：25℃。关键词食用真菌5898菌生物学特性营养菌丝的确证抗真菌作用抗真菌活性组分5898一YE抗真菌谱抗真菌机理分离提取发酵工艺$}本课题为云南大学]：业微生物发酵I：程重点实验宝开放基金资助项目。日U吾一、抗真菌抗生素及其国内外的研究状况真菌感染是I胤来上较顽固的一类疾病。真菌可引起皮肤粘膜、皮下组织和内脏的感染，其中表皮、毛发和甲板的真菌感染称浅部真菌感染；皮下组织、内脏的真菌感染称深部真菌感染

7、。前者的致病菌主要有表皮藓菌、小孢子菌、七藓菌等：后者的致病菌可分为两种：一类是原发致病真菌．如粗球孢子丝菌、巴西副球孢子苗、荚膜组织胞浆菌、申克氏孢子丝菌、皮炎牙生菌等：另～类是条件或继发致病真菌，如新型隐球菌、各种念珠菌、毛霉茁、曲霉菌等(徐积思，1991)。一般情况下，真苗不侵入机体组织或侵入机体但由于宿主的自生防御系统保护而未致病。但近年来由于广谱抗菌素的滥用，免疫抑制剂、激素、抗癌抗生索的使用．以及器官移植手术的施行、爱滋病患者和吸毒人数的增加，真菌感染尤其是机会性深部真菌感染已十分严重(徐正等．1994)，是界医学界的一大难题

8、(侯幼红，1993)。但能有效治疗真菌病的药物却十分缺乏。目前己投入使用或在临床阶段的抗真菌抗生素根据分子结构类型和作有机制将抗真茁抗生索归纳为5大类(MOhlbacherJM，1992)15