通心络对家兔血管成形术后细胞凋亡及基因蛋白表达的影响

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1、中国医科大学硕士学位论文通心络对家兔血管成形术后细胞凋亡及基因蛋白表达的影响姓名：刘冬梅申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：刘闺男20030401中文摘要前言(血管成形术后再狭窄(Rs)的发生严重制约了此技术的发展，有研究提示，血管平滑肌细胞(VSMC)是形成Rs的基础，VSMC的迁移、增殖、分泌和凋亡导致了血管RS的发生、发展和转归，而细胞凋亡在其中的作用逐渐受到人们的重视，认为凋亡不足可能是RS发病的关键因素。参与调节细胞凋亡的基因有很多，其中研究较多的是Bcl一2和Bax，二者的比例决定细胞是否发生凋亡，比值增高细胞趋于存活，比值降低，细胞趋于凋亡。有关RS的防治研

2、究很多，药物治疗以其具有无创、价廉的优点易为病人所接受，但迄今为止，尚未发现一种确实有效的药物。斗通心络是一种复方中药制剂，有研究证明通心络可以抑制血管内皮损伤后的内膜增殖，但其对内皮损伤后的细胞凋亡有何影响尚未见报道，本研究通过构建家兔动脉粥样硬化和血管成形术模型，使用通心络做药物干预，以探讨通心络对血管成形术后家兔细胞凋亡及基因蛋白表达的影响。}实验材料与方法＼、、一、建立动物模型1．实验动物：日本纯种雄性大耳白兔60只，体重2．5±0．5Kg，月龄6～8个月。2．动脉粥样硬化及血管成形术模型的建立：家兔适应性饲养1周，随机分为三组：单纯拉伤组、高脂拉伤组、通心络治疗组，

3、每组20只，单纯拉伤组喂普通饲料2009／d；高脂拉伤组和通心络治．1．疗组喂普通饲料加胆固醇，普通饲料1509／d，胆固醇1．5e：,／d／kg。喂养4周后行腹主动脉内皮剥脱术，术后喂养同前，4周后动物在x光下先行腹主动脉造影，然后对其造影显示狭窄>30％的部位进行球囊扩张，再次造影，狭窄消失为扩张成功，共成功建立家兔血管成形术模型45只。二、血管组织切片的制备及病理学检测处死动物前自心脏左室活体灌注4％多聚甲醛，灌流固定，暴露从主动脉至股动脉全长血管，取PTCA部位血管1．0era，以多聚甲醛固定，石蜡包埋后，连续切片，分别作HE染色、细胞凋亡检测(TUNEL法)及PCN

4、A、Bcl一2和Bax的免疫组化染色。染色后用计算机图像分析系统测算阳性细胞的光密度值。实验结果1．HE染色结芽．蝈显新生内膜形成，内膜、中膜增生明显，j--。’j．，￡高脂拉伤组轻。2．免疫组化结、一

5、-。1)PCNA及凋亡细胞的表达结果，高脂拉伤组的PCNA表达增多，遍及整个血管全层，通心络治疗组PCNA表达明显减少，两组阳性细胞光密度差异显著(P<0．05)。凋亡细胞表达则正好相反，高脂拉伤组少见，通心络组明显增多，二者阳性细胞数差异显著(P

6、比差异显著(P<0．05)。Bax表达在高脂拉伤组较单纯拉伤组降低，通心络治疗组表达明显上升，阳性细胞光密度相比差异显著(P

7、。Bct一2与Bax的比例可能是决定该细胞是否发生凋亡的重要因素。本实验结果显示，高脂拉伤组家兔VSMC中Bcl一2蛋白表达较单纯拉伤组明显增加，而Bax蛋白表达降低，这可能与其细胞凋亡减少有一定关系，通心络治疗组家兔VSMC中Bcl一2蛋白表达较高脂拉伤组明显减少，而Bax蛋白表达则增加。本实验中通心络下调血管成形术后VSMC的Bcl一2蛋白表达，并一定程度上调Bax蛋白表达，表明其促进VSMC凋亡作用可能与其参与下调细胞凋亡抑制基因Bcl一2的蛋白表达，并上调细胞凋亡促进基因Bax的蛋白表达有密切的联系。总之，实验结果说明，家兔血管成形术后VSMC凋亡减少，VSMC的Bc

8、l一2蛋白表达上调，Bax蛋白表达下调；通心络可以促进VSMC凋亡，且具有明显下调Bcl一2蛋白表达，上调Bax蛋白表达的作用。)7～·3·结论1．Bcl一2和Bax参与了家兔动脉粥样硬化血管成形术后VSMC的调节。2．通心络可以促进家兔动脉粥样硬化血管成形术后血管局部SMC的凋亡，其作用与下调Bcl一2的表达和上调Bax的表达相关。关键词：通心络；血管成形术；再狭窝；细胞凋亡；Bcl一2；Bax／、·4-TheeffectsofTongxinluoontheapoptosisandapoptosisr