《CE概述原理》PPT课件

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1、高效毛细管电泳技术概述电泳的发展历史电泳是一种带电粒子在电场中泳动的现象。电泳现象发现得很早，但将这种现象用于生物化学领域，尤其是临床医学和检验医学领域却是近几十年的事。20世纪60—70年代，当滤纸、聚丙烯酰胺凝胶等介质相继引入电泳以来，电泳技术得以迅速发展。丰富多彩的电泳形式使其应用十分广泛。电泳的发展历史电泳技术除用于小分子物质的分离分析外，最主要用于蛋白质、核酸、酶、甚至病毒与细胞的研究。由于电泳技术具有快速、简便、高分辨率及选择性等优点，电泳技术的种类逐渐增加，手段与仪器日趋完善，以致现在己成为检验医学常规分析、教学和科研中不可缺少的“常规武器”。电泳的发展历史18

2、09年，俄国物理学家Reuss进行了世界上第一次电泳实验。他用两根玻璃管插入一块湿粘土中，容器灌满水，管底放一层沙，然后封闭起来并通电。其结果是连接阳极的管中的水由于胶体粘土颗粒通过沙层的电泳迁移而变得混浊，而连接阴极的管中的水变得清澈，并且增加了体积，显示了电渗（electro-osmosis）现象。1909年Michaelis把胶体离子在电场中的迁移定名为“电泳（electrophoresis）”。电泳的发展历史从19世纪初到20世纪中的150年中，早期电泳技术虽然得到了发展，但由于移界电泳装置比较昂贵，而且分辨率有限，同时因为溶液受热后发生密度变化，产生对流，使区带扰乱

3、，故在20世纪50年代以后又发展了支持物电泳，如滤纸电泳、醋酸纤维素薄膜电泳、淀粉凝胶电泳、免疫电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等技术。电泳的发展历史这些方法，设备简单、操作方便，有很高的分辨率和选择性，所分离成分的检出可利用染色、紫外吸收、放射性测定、生物活性测定等，有高的灵敏度，特别是20世纪70年代后一些自动化仪器的相继出现与应用，使得电泳技术在生化研究和临床生化检验方面发挥了巨大作用。电泳的发展历史20世纪20—30年代，电泳技术的理论与实践有了很大发展。瑞典Uppsala大学的物理化学教授Svedberg和他的同事利用在长波紫外光激发时蛋白质发绿色荧光的现象，在电泳过程中对

4、卵白蛋白进行照相。电泳的发展历史1937年Tiselius教授建立了移界电泳法（movingboundaryelectrophoresis），并利用其修改的U型电泳槽和电极装置首先证明了血清是由白蛋白、、和球蛋白组成的，为此他于1948年荣获了诺贝尔奖。移界电泳技术的应用改变了许多陈旧的观念，使与蛋白质有关的研究更加深入，极大地促进了基础医学和临床医学的发展。电泳的发展历史以下列出电泳技术和装置的发展简史。不难看出电泳技术和装置是物理学家、化学家、物理化学家、生理学家和生化学家们等经过许多代人的共同努力才得以不断发展与成熟。电泳的发展历史1809年Reuss进行第一次电

5、泳实验1923—1924年Svedberg在电泳时对带荧光的白蛋白照相1937年Tiselius建立移界电泳，并将血清分离成白蛋白和球蛋白，被称为“电泳之父”，并于1948年获诺贝尔奖1939年Svensson使用圆柱形透镜系统1939年Konig报告了用滤纸作介质电泳分离蛇毒黄色色素的方法1948年Svensson提出了pH梯度理论1953年Grabar和Williams使用免疫电泳1959年Raymond和Weintraub使用聚丙烯酰胺凝胺作为电泳支持介质1961年Svesson提出两性电解质理论基础1963年Hjerten进行不连续电泳1963年Fazekas将考马斯

6、亮蓝用于纸、琼脂等的染色1965年Meyer将考马斯亮蓝用于聚丙烯酰胺凝胶染色1966年瑞典LKB公司获得Ampholine专利电泳的发展历史1967年Shapiro进行SDS电泳1970年Laemm1i进行不连续SDS电泳1970年Helena公司设计推出快速扫描密度仪（quickscandensitometer）1972年Laurell进行火箭电泳1973年瑞典LKB公司推出水平电泳槽MultiphorI1975年Southern提出SouthernBlot（DNA印迹法）1975年Farell提出聚丙烯酰胺凝胶双向电泳1979年Towbin提出WesternBlot（蛋

7、白质印迹法）1979年Merril、Switzer应用银染色法1985年Mocremans应用金染色法1986年瑞典Pharmacia公司发明半干技术1989年Beckman公司P/ACE高效毛细管电泳仪诞生1994年Beckman公司P/ACE5000高效毛细管电泳仪问世1997年Beckman公司P/ACEMDQ系列产品出现高效毛细管电泳概述电泳分离是依据电场中溶质不同的迁移速率。在高效毛细管电泳（HPCE）中，电泳是在细毛细管中进行，管内径一般在25到75µm之间，管内通常只充有缓冲液。使用毛细管