脱氢表雄酮对雄鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制的初步研究

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1、第一军医大学硕士学位论文脱氢表雄酮对雄鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制的初步研究姓名：王子东申请学位级别：硕士专业：心血管内科指导教师：吴赛珠20030601英文缩略词表英文缩英文全称中文全称ASAtherosclerosis动脉粥样硬化VSMCsVascularsmoothmUSClecells血管平滑肌细胞SMCSmoothmuscleceU平滑肌细胞CHDCoronaryheartdisease冠心病DHBADehydroepiandrosterone脱氢表雄酮D}IEASDehydroepiandrost

2、eronesulfate硫酸脱氢表雄酮TNF．aTunlornecrosisfactoralpha肿瘤坏死因子一n血管紧张素IIl型受ATlAngiotensinIItype1receptor体血小板源性生长因PDGFPlateletderivedgrowthfactor子Plateletderivedgrowthfactorbeta血小板源性生长因P】DlGFR·Brec印tot子B受体细胞外调节蛋白激ERKExtracellularregulatedkinase酶丝裂原激活蛋白激MAPKMitogenactivat

3、edproteinHnase酶EREstrogenrecepto／-雌激素受体ARAndrogenreceptor雄激素受体NoNitricoxide一氧化氮NoSNitricoxidesynthase一鬣化氮舍酶人主动脉血管平滑HASM：CHu∞Aa珏aortasmoothmusclecell腿缨胞ⅡNInterferon干扰索Ⅱ，lInterleukin．1‘自介素一1狂，lhterleukin-6皂分素一5姗Dithoiothreitol二硫苏糖醇N-各羟乙蕊冁嗪HEPESN-2-hydroxyethylpipe

4、razine-N’-N'．2．乙磺酸P蚤疰SFPhenylmethylsutfonylfluoride苯帮蓬磺酰氟Glyceraldehydes3phosphate甘油醛．3．磷酸脱氢G3APDl王dehydrogenasc酶’IBS．rHs-bufferedsalineTris缓冲盐水N．三羟甲基氨基甲TdsN-trishydroxymethyl烷EDz茂Ethylenediaminetetraaceticacid乙二胺酉乙馥oDOpticaldensi移光密度脱氢表雄酮对雄性大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制

5、的初步探讨中文摘要目的：绝经前女性冠心病(cHD)的发病率明显低于男性已是不争的事实，因此，围绕雌激素对心血管保护作用的研究成为众多学者争相探索的热点，已有大量的研究报道试图阐明其保护机制。雌激素对女性具有保护作用，那么男性体内的雄激素是否也具有心血管保护作用自然成为人们思考的一个课题。近年来的研究表明雄激素主要是睾酮类制剂对男性心血管具有阳性或者是中性的保护作用。长期以来性激素的前体一脱氢表雄酮(DHEA)被人们看作是一种雄激素，大多数研究表明其对男性也具有抗动脉硬化和抗CHD作用。作为动脉硬化粥样斑块病变组成的血管

6、平滑肌细胞(vsMcs)的大量增殖是AS发生的病变特征之～，众多活性因子及信号传导通路参与、调控了VSMCs的增殖。大量的研究证明：细胞间粘附分子(ICAM-1)、血管紧张素Ⅱ1型受体(ATl)和血小板源性生长因子0受体(PDGFR-B)与VSMCs增殖密切相关。鉴于脱氢表雄酮对VSMCs增殖及其调控因子的研究较少，本研究旨在细胞水平观察脱氢表雄酮对VSMCs增殖的影响，继而探讨脱氢表雄酮对VSMCs增殖活性刺激因子表达的关系，拟初步探索脱氢表雄酮对VSMCs增殖的可能作用机制，为脱氢表雄酮对男性心血管的保护作用提供部

7、分理论依据。方法：1．贴块法培养血管平滑肌细胞，采用第3-6代细胞，使用不同浓度DHEA及ER和AR拮抗剂对细胞刺激24小时，MTT法检测DHEA对VSMCs增殖的影响。．1一2．采用第3．6代血管平滑肌细胞，给予104MDHEA刺激24小时，裂解细胞提取蛋白，考马斯亮蓝G．250染色法测定蛋白浓度，使用WesternBlotting法检测PDGFR．0蛋白表达量。3．采用第3-6代血管平滑肌细胞，给予10’8MDHEA刺激24小时，提取总RNA，RT-PCR法检测ATlmRNA的相对表达量。裂解细胞，考马斯亮蓝G．2

8、50染色法测定蛋白浓度，使用WesternBlotting法检测ATl蛋白表达量。4．采用第3-6代血管平滑肌细胞，设三组，一组为空白，一组为对照(10ng／mlTNF-a)，一组为DHEA刺激组(10ng／rmTNF-d+10-8MDHEA)刺激24小时，提取总RNA，RT-PCR法检测ICAM．1mRNA的相对表达量。裂解细胞