沼泽红假单胞菌NS04的分离、鉴定及其在暗纹东方鲀养殖上的应用

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1、南京师范大学2004届硕士学位论文沼泽红假单胞菌(NS．04)的分离、鉴定及其在暗纹东方鲍养碗上的应用研究摘要本文以从水塘污泥中分离出一株红假单胞菌(Rhodopseudomonas)Ns—04菌株为材料+对它进行了初步的菌种鉴定、营养成分分析、发酵条件的优化，并研究了不同浓度的NS一04菌株培养液在暗纹东方纯养殖中的作用。通过富集培养水塘污泥筛选光台细菌，经电镜观察形态学特征、活细胞扫描以及碳源利用试验了解菌株的生理生化特征，并通过16SrRNA的同源性比较，了解序列保守性。结果表明NS—04菌株革兰氏反应阴性，单个细胞为杆状至卵形，菌体大小为

2、0．6-0．9×1．2—2．0“m，二分分裂，极生或亚极生鞭毛，片层状光合内膜，位于细胞质膜之下并与之平行，菌落为棕红色，光照厌氧和黑暗好氧条件下均可生长，菌体富含类胡萝h素和细菌叶绿素a，能利用多种碳源，酵母膏对其生长有明显刺激作用，16SrRNA基因的分子系统学分析表明，该菌株与GenBank中的沼泽红假单胞菌菌株的同源性为97％，初步确定筛选出的NS一04菌株为沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)。通过对菌株的营养成分的分析可知，蛋白质、脂肪、灰分、可溶性糖类分别占细胞干重的61．24％、8．11％、7．5％

3、和5．73％，类胡萝b素占细胞干重的4．24mg／g，富含维生素B：、B6和烟酸，氨基酸比值达92．38％，必需氨基酸总含量达40．92％，必需氨基酸与非必需氨基酸比值为79．52％，符合FAO／WHO对饲料的理想模式，是一种比较优质的饲料蛋白源。菌株的发酵条件优化试验表明，比较理想的发酵培养基配方(g／L)为：黄豆芽100，苹果酸1．5，乙酸钠2，微量元素l，pH7．0。最适发酵条件：接种量1％，装液量为80mL／250mL，40001x光照下，30℃好氧培养36h后转入厌氧培养24h。在此条件下生物量的活菌数可达到1．4X109cfu／mL，

4、符合农业部的标准。将光合细菌应用于特种水产养殖上，初步研究了施加不同浓度光合细菌在暗纹东方鲍养殖中的效果。试验表明添加光合细菌浓度在50ug／L以上时能有效的改善养殖水环境，使DO浓度增加，COD、BOD；、氨态氮、亚南京师范大学2004届硬士学位论文沼泽红假单胞菌(NS．0a)的分离、鉴定及其在暗纹东方喜屯养殖上的应用研究AbstractThisarticleelaboratelystudiedtheidentification、analysisandevaluationofnutrientcomponents、theoptimumfermen

5、tationofPhotosyntheticbacteriaNS一04whichisolatedfromthesludgeofthepondinNanjingInaddition，theeffectofdifferentconcentrationsofstrainNS一04ontheaquacultureonTakiflaguobscurusisalsostudied．Photosyntheticbacteriawerescreenedbyenrichmentculturefromthesludge．Transmissionelectronmic

6、rostcope、testsofusingdifferentcarbonsourcesofPSBandofabsorptionoflivecellsuspensionwereusedtoseethebiologicalcharacterofthePSB．maddition．wealsoanalysedthesequenceof16SrRNAofthePSBtoknowthehomology．ThestrainNS一04screenedfromthesludgeisaGram-negativebacterium．Cellisovoidorrodin

7、shape，0．6—0．9gmwideand1．2—2．0gmlong，multriplicationbybinaryfission．Thephotosyntheticmembrancewaslamellartype，whichisunderandparalleltointro—cytoplasmicmembranee．ThecloneappearedbrownwithmajorpigmentsbeingBchllaandcarotenoids．PSBNS一04cailgrowbothunderanaerobicconditioninthelig

8、htandaerobicconditioninthedark．Thegrowthofcellscarlalsopromptedbyyea