血红蛋白抗大鼠大肠埃希菌阴道感染研究

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1、血红蛋白抗大鼠大肠埃希菌阴道感染研究作者：周新娥欧阳运薇潘小玲何跃东李恒邓璐霞黄宁吴琦【摘要】目的：探讨血红蛋白在大鼠体内是否具有抗菌抑炎作用。方法：构建大鼠阴道感染模型后随机设立实验组和对照组，阴道给予血红蛋白后观察子宫宫颈阴道脏器指数，并采用组织病理切片检测血红蛋白治疗前后各组指标变化。结果：子宫宫颈阴道脏器指数经统计学分析示血红蛋白组、模型对照组间无差异(P>0.05)，基质对照组与前两组比均有显著性差异(P<0.05)，基质对照组的脏器指数增加明显。结论：血红蛋白能减轻大鼠大肠埃希菌阴道感染炎症病变程

2、度。【关键词】血红蛋白;抗菌抑炎;大肠埃希菌性阴道炎女性生殖道感染是妇产科的常见病、多发病，各年龄组均可发病。大肠埃希菌既是女性阴道正常菌群之一，又是引起女性生殖道感染常见革兰阴性菌之一，比如，在近25%的细菌性阴道病患者中可以分离到大肠埃希菌。8　　血红蛋白除了最基本的携氧功能外，新近发现血红蛋白及其片段还具有抗菌的生物学活性[1-3]。迄今，血红蛋白及其片段的抗菌活性研究均见于体外实验，而无整体动物实验报道。因此我们建立大鼠大肠埃希菌阴道感染模型，通过阴道局部给予血红蛋白，探讨血红蛋白在体内是否具有抗菌抑炎作用，从而

3、为将来直接应用或者间接通过基因工程生产血红蛋白片段重组产品用于临床包括女性生殖道感染在内的防治提供实验数据。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1主要试剂一氧化碳购自四川天一科技股份有限公司。　　1.1.2实验动物雌性Wistar大鼠，性成熟未交配，体重180.2±5.8g，由四川大学华西医学中心实验动物中心提供。　　1.1.3病原体大肠埃希菌临床分离株来自四川抗生素研究所馈赠。　　1.2实验方法　　1.2.1裂解红细胞、分离提纯出血红蛋白取志愿者数毫升血液肝素抗凝，通入一氧化碳气体180s并轻摇，生理盐水洗三次，

4、离心除上清，加入0.2倍体积二氯甲烷漩涡振荡3min后离心取最上层，再重复加入二氯甲烷处理。避光60℃8加热1h，离心取上清，即为血红蛋白。　　1.2.2建立大鼠阴道感染模型无菌条件下切除大鼠双侧卵巢，皮下注射苯甲酸雌二醇建立和维持假动情期，皮下注射氢化可的松琥珀酸钠造成全身免疫力低下，生理盐水反复冲洗阴道后，阴道内注入大肠埃希菌(2.1×109CFU·ml-1)，每日接种一次，共接种三次。每日观察大鼠外观和阴道外口分泌物、局部有无红肿等炎性表现。造模动物隔日交替皮下注射苯甲酸雌二醇或氢化可的松琥珀酸钠，以维持动情期和免

5、疫功能低下状态。感染5d后肉眼和病理组织学检查阴道粘膜充血、水肿或炎细胞浸润等者为感染成功。　　1.2.3实验动物的分组及处理将感染成功的大鼠随机分组：基质对照组(感染后不治疗，n=7)，血红蛋白治疗组(实验组,n=9)，每只每天阴道给血红蛋白5mg，连续5d。另设模型对照组(n=5)，正常对照组(n=2)。　　1.2.4病理观察末次给药后24h将大鼠处死取子宫宫颈阴道标本，先进行肉眼观察、称重。计算脏器指数：子宫宫颈阴道重量(g)/体重(g)然后进行常规石蜡切片，HE染色，镜下观察阴道组织形态学变化及粘膜、粘膜下间质形

6、态学的炎症改变程度，根据评定标准评定炎症程度。8　　A：动情间期B：动情期　　图1大鼠阴道分泌物涂片(200×)　　1：白细胞2：有核扁平上皮细胞3：角化上皮细胞1.3统计学处理采用统计软件spss13.0，单因素方差分析。　　2结果　　2.1实验大鼠动情周期的监测　　大鼠去卵巢后的阴道分泌物涂片镜下观如图1A，镜下见大部分是白细胞，偶尔可见有核扁平上皮细胞。给予苯甲酸雌二醇后的阴道分泌物涂片镜下观如图1B，镜下见膨大的上皮细胞核消失，脱落的角化上皮细胞并聚，似落叶堆叠。如去卵巢后大鼠的阴道涂片不似图1A，说明该只大鼠的

7、卵巢未切除完全，剔除该只大鼠;如给予苯甲酸雌二醇皮下注射后的阴道分泌物不似图1B,进一步说明该只大鼠的卵巢未切除干净存在内源性雌激素，也剔除该只大鼠。　　2.2大鼠的子宫宫颈阴道脏器指数的影响8　　血红蛋白组、模型对照组间无差异(P>0.05)，基质对照组与前两组比有显著性差异(P<0.05)，血红蛋白组的脏器指数较基质对照组的减少明显，提示血红蛋白能减轻感染后的局部水肿等炎症程度，见表1。　　2.3大鼠阴道组织形态学观察　　从图2可见，模型对照组大鼠复层扁平上皮较正常大鼠稍厚，表层平滑完整，固有层全层较疏松

8、，余未见异常;基质对照组大鼠复层扁平上皮表层不平滑，固有层内有大量的炎细胞浸润伴血管扩张充血;与基质对照组相比，血红蛋白组大鼠阴道复层扁平上皮表层较平滑，固有层内炎细胞浸润明显减少，且组织内充血明显减轻。复层扁平上皮的增厚可能与外源性雌激素的作用有关，因为雌激素可导致阴道复层扁平上皮增生和角化，粘膜增厚。表1血红蛋白