水牛和黄牛同种内及种间显微受精的初步研究

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1、广西大学硕士学位论文水牛和黄牛同种内及种间显微受精的初步研究姓名：牛向丽申请学位级别：硕士专业：动物遗传育种与繁殖指导教师：石德顺2003.6.1硕i：论文：水牛和黄牛同种内及种间显微受精的初步研究水牛和黄牛同种内及种间显微受精(ICSI)的初步研究摘要本研究探讨了水牛和黄牛显微受精的影响因素及其种间受精的可行性。体外成熟22．24小时的水牛和黄牛卵母细胞分别注入冷冻尼里-拉菲水牛和利木赞黄牛精子，然后培养16．18h固定染色检查原核形成情况，培养48h检查分裂率，／继续培养7-9d记录囊胚发育情况。眙果发现，水牛同种(水牛+水牛)和水牛异＼种(水牛

2、+黄牛)显微受精的双原核率(47．73％VS36．67％)，分裂率(68％vs72．63％)和囊胚发育率(16．44％VS22．39％)均无显著差异(p>0．05)；黄牛同种(黄牛+黄牛)和黄牛异种(黄牛+水牛)显微受精的双原核率(60％VS45．28％)，分裂率(73．33％vs71．31％)和囊胚发育率(28．57％vs33．70％)亦无显著差异(p>O．05)。当用添加有l∞p,g／mL溶血卵磷脂的受精液预处理水牛精子时，水牛同种ICSI后的分裂率(80．41％vs87．25％)和囊胚发育率(6．7％VS10．78％)无明显影响(p>O．05)

3、。黄牛卵子和水牛精子异种受精的囊胚经常规冷冻保存，解冻后24h的存活率为63．89％(23／36)，培养48h后的囊胚孵化率为30．56％(11／36)，与未冷冻的囊胚孵化率(34．78％，16／46)无显著差异(p>O．05)。、以上路果表明：①水牛精子注射到黄牛卵子和黄牛精子注射到水牛卵子的／种间受精胚胎可以体外发育到囊胚阶段，且其获得的囊胚具有较好的抗冻性。②黄牛卵子无论同种和异种显微受精的效果均优于水牛卵子。③溶血卵磷脂预处理水牛精子对其ICSI效果没有明显影响。关键词：水牛，黄牛i卵母细胞～种啕种闾0显微受精J／叫，堡!：丝塞!查±塑薹!堕

4、堂塑墨登塑呈堂墨堑塑塑生塑塞一．APRELIMINARYSTUDY0NTHEINTRASPECInCANDINTERSPECIFICFERTILIZATIoNBETWEENBUFFALoANDCArrLEBYINTRACYTOPLASMICSPERMINJE(_IONFactorsaffectingthefertilizationofbuffaIoandbovineOOcytesbysperminjectionwereexamined，andthepossibilityofintraspecificfertilizationbetweenbuffaI

5、oandcattlewasalsoexploredinthisstudy．BUffaIoandbovineoocytesmaturedinvitrofor22．24hwerefertilizedbyinjectionofbuffaloOI"bovinefrozen-thawedspermatozoa．At16-18hafterinjection，aportionofoocyteswerefixedinaceticethanoltoexaminethepronuclearformation，otherswereculturedinvitrotoeval

6、uatetheircleavagerateandembryonicdevelopmentalability．Therewasnotdifierenceinthetwopronuclearformationrate(47．’73％VS36．67％)，cleavagerate(68％VS72．63％)andblastocystdevelopment(16．44％VS22．39％1ofbuffaIooocytesfertilizedwithbuffaIo(intraspecies)andbovinesperm(interspecies)．(p>0．05)．

7、Thetwopronuclearformationrate(60．00％)，cleavagerate(73．33％)andblastocystrate(28．57％)ofbovineoocytesfertilizedwithbovinesperm(intraspecies)werealsonotdifferentfromthose(45．28％，71．31％and33．70％respectively,p>0．051ofbovineoocytesfertilizedwithbuffalosperm(interspecies)．Treatmentofbu

8、ffalospermwith100I．tg／mLlysophosphatidedidnotaffectthe