资源描述：
《利用AFLP技术研究条斑紫菜的遗传变异》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、第27卷第3期海洋学报Vol.27,No.32005年5月ACTAOCEANOLOGICASINICAMay2005利用AFLP技术研究条斑紫菜的遗传变异1,22222杨锐,刘必谦,骆其君,王亚军,包佳美(11中国科学院海洋研究所实验海洋生物学重点实验室,山东,青岛266071;21宁波大学海洋生物工程重点实验室,浙江,宁波315211)摘要:利用AFLP技术对11个条斑紫菜品系进行了研究.由16对引物共扩增出778条谱带,其中仅15条为共有谱带,多态位点的比例高达98107%.日本鹿儿岛,我国的青岛、江苏、浙江等不同地点的野生或栽培条斑紫菜品系之间最近的遗传距离为01180(两个日本样本之间
2、),最远为01397(日本样本与江苏样本之间),属于物种内种群间的遗传变异.聚类结果显示日本的样本与青岛的野生样本间的遗传相似系数较高而聚合在一起;浙江野生条斑紫菜与江苏的样本遗传距离相近,聚合在一起.结果表明,我国条斑紫菜的遗传多样性程度较高而且各品系间的遗传距离与其地理间距呈正相关关系.关键词:条斑紫菜;AFLP;遗传变异+中图分类号:Q34615文献标识码:A文章编号:0253-4193(2005)03-0159-04性等优点,可重复性好,结果呈现典型的孟德尔遗1引言传;每个AFLP反应可检测的位点多达50~100紫菜(Porphyra)属红藻门(Rhodophyta)红毛个,信息量大,
3、非常适合于遗传多样性、种质鉴定、标菜科(Bangiacea),广泛分布于从寒带到亚热带的潮记辅助育种、基因定位和快速构建遗传图谱等研[3~6]间带水域.据不完全统计,现在世界上约有130多种究.采用AFLP技术对来源于不同地点的条斑[1]紫菜.我国紫菜约有19种,分布于辽宁、山东、江紫菜(Porphyrayezoensis)品系进行遗传变异比较,苏、浙江、福建省至海南岛等沿海海域.目前我国紫以期为其种质资源调查、遗传多样性的保护以及品菜产量占全世界的1/4,列世界第三.辽宁、山东和系培育和品种改良提供依据.江苏省以栽培条斑紫菜为主,而浙江和福建省等地2材料与方法以栽培坛紫菜为主.除从日本引进的
4、几个试养品种外,我国栽培的紫菜多为未经遗传改良的自然群体.211材料种质良莠不齐成为限制紫菜栽培产业发展的重要因11个条斑紫菜品系样本的采集时间和地点见素,因此有必要从紫菜遗传背景等方面进行深入表1.来自青岛市、浙江省普陀海区和南麂列岛的为研究.野生条斑紫菜,南通和鹿儿岛的为栽培样本.将不同AFLP(amplifiedfragmentlengthpolymor-品系紫菜新鲜叶状体洗净后晾干,装入塑料袋后密phism)技术是1993年由Zebeau发明继而由Vos闭,-70e保存.[2]等发展起来的一种选择性扩增限制性片段的方212基因组DNA的提取及浓度测定法.该技术结合了RFLP的可靠性与R
5、APD的方便取经研磨的约30mg液氮紫菜,采用改良的收稿日期:2003-07-08;修订日期:2003-12-30.基金项目:浙江省重点项目(2004C22045);浙江省自然科学基金(M403015);宁波市重点博士基金资助项目(02J20110-15).作者简介:杨锐(1972)),女,山东省青岛市人,博士,从事海洋动植物遗传工程研究.E-mail:yangrui@nbu.edu.cn160海洋学报27卷GenomicDNAMiniprepsKit法(试剂盒为上海生#工公司产品:NSBC-Sangon,catsk252)提取基因组DNA.增加酚-氯仿-异戊醇(50B49B1),氯仿-异戊醇
6、(24B1)抽提和RNase处理的步骤以除去过多的蛋白质和RNA.DNA经017%琼脂糖凝胶电泳-EB染色检测并用紫外分光光度计测定浓度.表1条斑紫菜采集地点与时间样本号数原产地采集时间1~3日本鹿儿岛(栽培)(31b32c40dN,1999年3月130b32c20dE)4~6山东省青岛(野生)(36b05c20dN,2000年1月120b21c58dE)7~9江苏省南通(栽培)(32b01c20dN,1997年11月120b52c30dE)10浙江省普陀(野生)(30b00c30dN,1999年4月122b06c12dE)11浙江省南麂列岛(野生)(27b30c10dN,1998年4月121
7、b42c20dE)图1条斑紫菜ACT-CAG扩增图谱213AFLP[2]AFLP实验分析参照Vos等方法.试剂均为MBI公司产品.选择性引物序列为EcoRI:GACT-GCGTACCAATTC-ACA,-ACG,-ACT,-ACC;MseI:GATGAGTCCTGAGTAA-CAA,-CAG,-CTA和-CAC.凝胶电泳系统为Bio-Rad公司产品:Sequ-iGenGTnickeicacidel
