浅谈腺病毒载体介导的遗传病基因治疗研究和应用进展

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1、使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http://www.docin.com/mtl168168，分享文档快乐生活快乐无阻浅谈关键词： 人类腺病毒；遗传性疾病；基因疗法     一群分布广泛的呼吸道病毒，a:60～90nm，无包膜，20面体立体对称型。分为大约47个血清群，其中ad2、ad4、ad5和ad7在疫苗和基因转移载体研究方面，应用最普遍。腺病毒粒子衣由252个壳粒组成，几何排列成240个非顶角六邻体和12个五邻体。基因组为双股dna，呈线性，长度大约36kb。腺病毒的转录区分早期（early,e1、e2、e3、e4）转录区和晚期（late）转

2、录区。复制周期大约为32～36小时。　　腺病毒载体法是基因治疗中最有前途的基因转移方法之一。其生物学特性得到广泛研究。ad有一个中等大小的基因组（平均36kb），适合于容纳于大片段基因，与反转发病毒载体相比，腺病毒载体能有效地外源基因转动到各种靶细胞或组织中。载体容易构建和操作。宿主范围广，感染性强，可经不同途径进入不同组织，能感染分化后的非分裂期细胞。在ad生活周期中，其基因不整合到宿主细胞中，无插入突变激活癌基因的危险，外源基因能游离地表达。ad制成疫苗临床应用表明，体内基因转移是安全是。8使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http://www.

3、docin.com/mtl168168，分享文档快乐生活快乐无阻　　最近几年，ad载体已引起科研人员的广泛关注，ad可用于遗传病、传染病和肿瘤等疾病基因治疗的研究和应用。　　一、不同动物组织中腺病毒介导的基因转移　　rosenfeld等1把α1抗胰蛋白酶（α1-an-titrypsin,α1-at）基因转动到肺上皮细胞中，证实重组腺病毒载体和其野生型病毒一样，易感染宿主上皮组织，特别是呼吸道上皮组织。但把ad载体通过静脉注射到小鼠模型体内，也可在肝内检测到大量载体。科研人员在不同动物模型上作了大量基因转移试验，证实采用气管内皮滴注法，肌肉注射、脑门实

4、体接种等方法可感染ad，感染部位有呼吸道内皮组织，肝组织、眼组织、羊膜内腔等。研究证明，重组ad载体把目的基因转动到不同组织中，为ad载体介导的遗传病基因缺陷纠正治疗提供了理论基础。　　二、腺病毒介导的α1抗胰蛋白酶基因转移8使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http://www.docin.com/mtl168168，分享文档快乐生活快乐无阻　　大量临床病例表明，α1抗胰蛋白酶（α1-at）缺陷症是高加索人肺部最普遍的致死遗传性疾病之一。rosenfeld等1构建了含ad主要晚期启动子（mlp）和重组人α1-at基因的复制缺陷型ad载体（ad-α1

5、at），体内外分别感染棉鼠呼吸道上皮细胞。lemarchand等2将ad-α1-at通过气管内滴注给小鼠后，在呼吸道上皮内可检测到人α1－at mrna，说明在肺组织内可合成并贮存人α1-at。在鼠的呼吸道粘液中也可检测到人α1-at（1.7μm），但会逐渐减少，一周后完全检测不到。通过静脉灌注，24小时后，可检测到平均13μg/ml的α1-at，证实了重组ad载体介导的体内内皮细胞基因转移的可能性。最近，kochanek等3利用缺失了整个病毒编码基因的ad载体，鼠尾静脉注转移19kb的人α1-at基因组，发现13周内在鼠血清中可检测到大约1μg/m

6、l的α1-at。　　三、腺病毒介导的低密度脂蛋白受体基因转移　　家族性高胆固醇血症（familial hy8使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http://www.docin.com/mtl168168，分享文档快乐生活快乐无阻percholesterolaemia,fh）是由低密度脂蛋白（lowdensity lipoprotein,ldl）受体缺乏导致而成，与高胆固醇和早期冠状动脉疾病有关。最初在细胞培养中证实了ad载体介导的ldl受体基因转移，注射过载体的小鼠血浆中胆固醇水平明显减少。据ldl受体的免疫荧光和β-半乳糖苷酶染色等实验检测，大约9

7、0%的肝细胞表达了ad转移的基因。kozarsky等4在转导的fh肝细胞中，ad.cbhldlr诱导的ldl受体蛋白至少比骨源性的要高20倍，将该载体注入一种叫新西兰白兔（nzw）中，发现nzw兔血清中胆固醇明显减少。kobayashik等5构建极低密度脂蛋白（vldl）受本的ad载体的相关研究也已开始。他们用3×1019pfu的ad mvldlr静脉注射ldlr（-/-）小鼠，结果表明，感染后4～9天，小鼠体内总胆固醇水平减少50%。ad载体介导的ldl和vldl受体基因转移方法是一种治疗ldl或vldl受体缺乏的有效方法，不足之处在于基因的表达量

8、需加强。 　　四、腺病毒介导的囊性纤维变性转导调节因子（cftr）基因转移　　ad载体介导的囊性纤维变性（c