铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆及重组干酪乳杆菌的构建

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1、成都理工大学硕士学位论文铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆及重组干酪乳杆菌的构建姓名：章轶锋申请学位级别：硕士专业：应用化学指导教师：唐善虎20080501成都理l：人学硕十学位论文中，构建重组质粒pT吓以C，再将其转化至大肠杆菌DH5a中；然后提取质粒并进行酶切、PCR鉴定和序列测定。结果表明成功地克隆了EcD厅CuZn．SOD基因片段。②暖cDffCuzn．sOD基因重组干酪乳杆菌的构建：利用软件设计并合成了一对引物PF(5’．CTGTCTAGAATGAAACGTllTAGTCTGGC．3’)、PR

2、(5’．CGCAAGCTTa盯AATTACACCAClAGGCA．3’)；以pT哂以C为模板进行PCR扩增，扩增产物克隆至pMDl8．T中，构建重组质粒pMDl8．T哂谢C；双酶切后将s以C基因的全编码序列克隆至pMG36e的劢口I和砌dIII之间的多克隆位点上，构建表达重组子pMG36e哂DdC；然后通过优化的电转化条件(电压2．5kV，电阻100Q，电容2和F)，将pMG36e心DdC转化至干酪乳杆菌L反c口sd，并对重组菌株进行质粒抽提、PCR鉴定、酶切鉴定。结果表明成功地构建了重组干酪乳杆

3、菌。这一技术平台为功能基因通过pMG36e载体在干酪乳杆菌中表达而更好的发挥转基因工程乳酸菌的双重功能开创了一条崭新的道路。关键词：超氧化物歧化酶乳酸杆菌基因克隆载体构建Il成都理丁大学硕士学位论文CloningofCoppeI--ZincSuperoxideDismutaseGeneandConstructionofRecombinedVbctorin血咖易口c站‰s(石s西IIltroductionoftheauthor：zhangYifeng，male，wasbominAugllst，197

4、4，whosesupeⅣisOrwasProfessOr1hngShanhu．He伊aduatedf两mChengduUniVersityOf’rechnologyinAppliedChemistrymajorandwasgrantedtheMasterDegreeinJune，2008．AbstractSuperoxidedismutase(SOD)isametal-containingeI亿ymewhichcanbefoundabundantlyinmicroo培anisms，pl觚tsora

5、nimals．F0urtypesofSODexistaccordingt0thepresent0fmetalcOfactOrattheenzyme拟ivesite：Cuzn—SOD，Fe-SOD，Mn—SODandNi-SOD．Theycatalysethedismutationofsuperoxide卸ionradicalintomolecul缸oxygenandhydrogenperoxide觚drelatedtothefIlncti咖sforagainstoxygcnpoiSon，resis

6、tancetoradiationdamageandanti．a百ng，andshowedcureef!fectsinsometumors，innammatorydiseasesandself-immunitydiseases．CuZn—SODhasbeenshOwntobeea’ectiVefortreatinginnammation，reducingreperfUsioninjuries，anddecreasingb100dpressureinanimalmodelsystems．Unfortu

7、nately，thiseI亿ymeismainlyseparated锄dpurificatedf如mo唱锄isminnature，卸ditstherapeuticpotentialisrestrictedbecauseofitslimitedamount．Bioen百neeringtechniquesmaysolVethisproblem．HoweVer，cu玎ently，onlyfewresearclleshavebeenreponedrelatedtoCuZn·sODgene(j以C)c10n

8、ing锄dexpression．L口cfD6口cf，胁sc口sPfisGRASbacteriaandhasbeenusedinfoodandphannseuticalindustriesextensiVely：HoweVer，thisbacteriumlacksofSODandcannotbeculturedinaerobicsystem，anditsapplicationsarelimitedinindustry．If锄SODgeneistransferredintothisba