莽山野柑特征香气相关候选基因克隆和功能鉴定

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1、分类号密级：华中农业大学硕士学位论文莽山野柑特征香气相关候选基因克隆和功能鉴定CloningAndFunctionalCharacterizationOfTheFruitAromaRelatedCandidateGenesFromMangshanyegan(CitrusnobilisLauriro)研究生：学号：指导教师：指导小组：专业：果树学方柳20113051l0020徐娟教授程运江教授邓秀新教授郭文武教授程运江教授徐强教授研究方向：分子生物学获得学位名称：农学硕士获得学位时间：2014年6月华中农业大学园艺林学学院，园艺植物生物学教育部

2、重点实验室二。一四年六月0IIIIIIIIIllIIIIIIIllIIIUIY2565584华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文季}如靠保密，解密时间年月日是否保密独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包金为获得华中农业太学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定．与我一回工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中傲了明确的说明，并表示了谢意．研究生签名：御时间：．

3、知，妒年占月6日学位论文使用授权书本入完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文姆规定，印学生硌须按照学校要求提交学位论文的Ep捌本jf扭电子版本；学校有权保存提交论文的印制版和电子版，并提供目录检索和阅览服务，可l；乏采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文．本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内客，为存在馆际合作荚系的兄弟高校用户提供文献传递和交换服务．同时本人保留在其他媒体发表论文妁权力．洼：保密学位论文(印涉及技术秘密、商韭秘密或申请专利等潜在需要提交保密的论文)在解密后适用于本授权书。

4、学位敝储张匆研导师馘：l蜥签名目期：知f眸莎月6日签名日期：山I悔易月易日莽山野柑特征香气相关候选基因克隆和功能鉴定目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一iAbstract．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．⋯．⋯⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．iii缩略图表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．v1前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11．1课题的提出⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．2植物单萜生物合成代谢和催化机理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21．3单萜合酶系谱发育和谱系分化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51．4单萜合酶的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61．4．1单萜合酶基因结构特点及相关功能性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一61．4．2单萜合酶基因表达调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．71．4．3单萜代谢工程⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、．．81．5本研究的目的与主要内容⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．102．2实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一102．2．1RNA的提取以及反转录合成eDNA⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．2．2D^彳豫．S和西[心候选基因的克隆和Real—timePCR⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯lO2．2．3原核表达载体构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯132．2．4

7、CsMYRS和CsLIS原核表达产物SDS—PAGE检测以及WesternBlot．．142．2．5CsMYRS和蚴原核表达蛋白纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．162．2．6DM豫S和C姐四蛋白体外表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．172．2．7其它柑橘品种中的L1S全长克隆⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．183结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．193．1CsMYRS和CsLIS基因的克隆和序列分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯193．2MYRS和LIS基因的表达分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2

8、03．2．1在莽山野柑中的表达水平分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯203．2．2在不同柑橘中的表达水平分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯213．3MYRS和L