Imds60在小鼠附睾中的表达特性及功能研究

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1、砌西．6D在小鼠附睾中的表达特性及功能研究目录目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1Abstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯3引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．5jij⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·．第一节附睾的结构和功能⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．5第二节精子在通过附睾时的变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．7第三节糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋自在精子成熟中的作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．

2、8第四节附睾小体及其相关蛋白在精子成熟中的作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．16实验动物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l6小鼠砌豳．甜基因及蛋白序列分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16组织总RNA的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16反转录RT-PCR实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16荧光定量Real．timePCR实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17小鼠阉割实验和雄激素补充实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18聚丙烯酰胺凝胶DN

3、A电泳⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18NorthernBlot分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．18小鼠IMDS一60的原核表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．19小鼠IMDS．60多克隆抗体的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．20小鼠组织蛋白的抽提⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．20精子蛋白的抽提⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。20附睾小体(Epididymosome)蛋白的抽提⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．21糖苷酶PNGase．F处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、2lWesternblot分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．21石蜡切片的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．22免疫组织化学实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．23精子涂片的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．23精子结合检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24抗体封闭实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24精子运动能力检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．24精子蛋白酪氨酸磷酸化水平检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．25

5、统计学分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．25L色奠钆殳&九歌乳均n硷BH=2M"博D如扒丝捣2012博士学位论文胁幽．卯在小鼠附睾中的表达特性及功能研究结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．261．小鼠IMDS．60蛋自在附睾中的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．261．1．小鼠砌出一卯基因结构及蛋白序列分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．261．2．小鼠IMDS．60蛋白表达纯化及抗体制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．281．3．小鼠IMDS．60蛋白在附差组织高表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．291．4．小鼠IMDS．60蛋白在附睾组

6、织区域特异性定位⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．301．5．小鼠IMDS．60蛋白在发育过程中的表达变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．311．6．小鼠IMDS．60蛋白在精子上的结合及定位⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．321．7．小鼠IMDS．60蛋白通过附睾小体(Epididymosome)进入附睾管腔⋯．．331．8．小鼠IMDS．60抗体封闭实验对精子运动的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．341．9．小鼠IMDS．60抗体封闭实验对精子获能的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一391．10．小鼠IMDS．60抗体封闭后IMDS．60结合在精子上⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯411．11．大鼠加出．印基因的组

7、织分布⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯422．Imds．60相关基因Fragl在附睾中的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．432．1．小鼠Fragl基因的组织分布⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．452．2．小鼠Fragl基因在发育过程中的表达变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一462．3．小鼠Fra91基因的表达受雄激素正调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．472．4．大鼠Fragl基因的组织分布⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．482．5．小鼠Fragl基因及大鼠Fragl基因Isoform的发现及鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯49总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯