云南松口蘑的遗传多样性研究

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1、第52卷第6期2007年3月论文云南松口蘑的遗传多样性研究①①②②②②①①③*沙涛张汉波丁骅孙李宗菊程立忠赵之伟张亚平(①云南大学生物资源保护与利用国家重点实验室培育基地,昆明650091;②云南大学生命科学学院,昆明650091;③中国科学院昆明动物研究所细胞与分子进化重点实验室,昆明650223.*联系人,E-mail:zhangyp1@263.net.cn)摘要对分布于云南省9个地市13个县的56个松口蘑(Tricholomamatsutake)子实体进行了ITS序列、IGS序列和反转录转座

2、子PCR图谱比较分析,发现ITS序列只有一种单倍型,IGS序列有3种单倍型,反转录转座子PCR图谱群体间的多态性不显著.对比我国东北和日本松口蘑的研究结果发现,云南松口蘑的遗传多样性较低,云南松口蘑和日本松口蘑同源,但松口蘑可能不是起源于云南.关键词松口蘑ITS1IGS1反转录转座子间扩增多态性松口蘑(Tricholomamatsutake(S.ItoetS.Imai)蘑的IGS1限制性片段长度多态性(RFLPh)较高.反[1,2]Singer)俗称松茸,是外生菌根真菌,主要分布转录转座子(ret

3、rotransposon)以高拷贝在真菌基因组在东亚的日本、韩国和中国等国家.由于其味道鲜中广泛分布,可以通过纵向和横向分别在世代之间美、营养价值十分丰富,是我国著名的食用真菌.近和不同种之间传递,同一家族的反转录转座子具有年来,由于国际市场需求量很大,我国每年出口创高度的异质性.因此,反转录转座子间扩增多态性汇金额达5000多万美元.由于松口蘑目前尚不能实(inter-retrotransposon-amplifiedpolymorphism,IRAP)现人工栽培,所有出口产品全靠自然采收.加上

4、采收已成功地应用于多种生物,如大麦的遗传多样性分[9][10]管理不当,种质资源量正快速降低,已被列为国家二析.Murata等人发现亚洲及美洲松口蘑的反转录级濒危保护物种.转座子呈现更高的多态性.云南是我国松茸的主产区之一,全省范围内都本研究结合了上述3种遗传标记,研究云南省松口蘑不同地理群体间以及与日本松口蘑的遗传差异,有分布,其松口蘑年出口量约占全国的1/4,年出口为进一步探索松口蘑与不同宿主植物间的共生机理,产值约3.2亿元人民币,是云南省的主要出口创汇农[3]进而为生态恢复区接种松口蘑菌根

5、菌,实施人工促产品之一.由于云南省极为多样的气候和植被类繁技术奠定基础.型为松口蘑的生长提供了丰富多样的生态位,一些学者认为我国西南是松茸群的多度中心、多样性中心1材料及方法[4]和现代分布中心,因此也是研究松口蘑的起源和(ⅰ)材料.松口蘑样品见表1和图1,假松口蘑遗传多样性的关键地区.为了制定科学的保护对策,(TricholomabakamatsutakeTF9)来源于昆明市嵩明县.了解云南松口蘑不同地理类群(居群)间的亲缘关系(ⅱ)PCR引物.ITS引物:ITS4(5′-TCCTCCG-和遗传

6、差异十分必要.CTTATTGATATGC)/ITS5(5′-GGAAGTAAAAGTC-[11]GTAACAAGG-3′);IGS引物:5SA-Anderson(5′-ITS(internaltranscribedspacer)目前被广泛应用[5]CAGAGTCCTATGGCCGTGGAT-3′)/CNL12(5′-CT-于不同水平的系统发育、进化和分类研究.瑞典农[8]GAACGCCTCTAAGTCAG-3′);反转录转座子引物:业科学大学(Uppsala)对亚洲松口蘑(Tricholomama

7、-pS48(5′-GAGGTGGGGAAAAATATGGGACGAAC-tsutake)以及瑞典松口蘑(Tricholomanauseosum)进行3′)/pL281(5′-CTTCACATATACTGGGCATCAGCA-[10]了DNA的分析比较,发现两地区的松口蘑ITS序列有AGGG-3′).以上引物由上海博亚生物技术有限公[6]司合成.99%~100%的吻合度.IGS(intergenicspacer)是rDNA中基因进化速度最快的区域,常用来进行种内(ⅲ)DNA提取方法.子实体总DNA的

8、提取采[7][8]用CTAB法.群体比较.Guerin-Laguette等人发现了日本松口2007-01-04收稿,2007-02-26接受“十五”国家科技攻关计划(批准号:2001BA707B01)、国家自然科学基金(批准号:30621092)和云南省科技厅(批准号:2005PG11)资助项目668www.scichina.com论文第52卷第6期2007年3月涂Amp/IPTG/X-Gal的LB平板,挑白斑检测目的片段并进行DNA序列测定.(ⅵ)DNA序列测定与分析.ITS和I