欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:36357378
大小:3.67 MB
页数:112页
时间:2019-05-10
《慢性胃炎脾虚证消化吸收障碍亚型差异表达基因生物信息学及临床研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、广州中医药大学博士学位论文慢性胃炎脾虚证消化吸收障碍亚型差异表达基因生物信息学及临床研究姓名:王桂香申请学位级别:博士专业:中西医结合临床指导教师:陈蔚文20070401诊断扩散型大B细胞淋巴瘤设计的基因芯片能用来区分出影响预后的两种临床类型,它们的病理相同,但却有着决然不同的两种基因特征及临床预后。但是,中医证候与西医疾病是不同的两个科学体系,中医的证候具有哲学思维,具有抽象性、模糊性、非定量的特点,是一个多因素参与和调控的,具有时空性、系统性、层次性、非线性表达及以“候”为证的复杂的临床症候群的反应,因此
2、,中医证候的基因差异表达结果的可重复性受到较大质疑,同时,中医证候基因差异表达谱有什么不同于西医疾病的特点,均有必要进行更深入的研究。慢性胃炎是一种胃粘膜的慢性炎症性病变,脾虚证是其主要证型之一。本课题组根据脾虚证临床症状较多而患者具体表现不一的情况,从脾虚证的临床表现中把与消化吸收关系密切的症状列出,组成慢性胃炎脾虚消化吸收障碍亚型,以使研究更集中于某一类型的患者。我们在前期研究工作中,发现在慢性胃炎脾虚证消化吸收障碍亚型(以下以脾虚证简称)患者中,脾虚证患者的胃粘膜基因表达与与正常人和脾胃湿热患者存在明显
3、差异,脾虚证患者在蛋白质合成代谢、免疫功能、能量及物质代谢相关基因的表达总体表现为下调趋向。据此,本研究拟重复我们第一批慢性胃炎脾虚证基因差异表达谱的实验工作,考证两批慢性胃炎脾虚证芯片差异表达基因的重复性及差异性,并在此基础上通过对证候症状体症及基因芯片差异表达基因及其编码蛋白功能的生物学信息分析,描绘出脾虚消化吸收障碍亚型差异表达基因的病理生理背景的假设,进一步完善脾虚消化吸收障碍亚型诊断标准。研究方法1、病例选择受试病例首先需要符合慢性胃炎诊断标准(临床、胃镜及病理诊断),然后符合脾虚证/脾胃湿热证辨证
4、标准,同时要排除消化道器质性病变及其他系统严重病变者。脾虚证辨证标准:主症①舌质淡、舌体胖或有齿印,苔薄白;②胃纳减少或食欲差;③腹胀;④大便溏或腹泻;次症:①消瘦:②体倦乏力;③脉细弱。判断:1)主症①必备。2)兼具主症②、③、④之二;或兼具主症②、③、④之一,同时兼具两个以上次症,诊断即可成立。脾胃湿热证辨证标准:主症①舌苔黄腻;②胸闷;③胃脘痞满或胀痛;④食欲不振。次症:①口苦而粘;②口渴而少饮,或喜热饮:③大便溏,或有粘液;④恶心;⑤身困乏力;⑥脉濡缓,或滑。判断:1)主症①必备。2)兼具主症②、③、
5、④之二,或兼具主症②、⑧、④之一,同时兼具两个以上次症;或兼具3个以上次症,诊断即可成立。正常健康者选择标准:临床辨证无明显异常,舌象脉象正常。胃镜下及病理检查胃粘膜无明显病变者。2、收集标本在广州中医药大学第一附属医院和广东省中医院按照上述标准收集慢性浅表性2胃炎脾虚证患者作为试验组(脾虚),慢性浅表性胃炎脾胃湿热证患者作为同病异证证型对照组(脾胃湿热),从志愿者中选择健康人作为正常对照组(正常)。参照中华医学会消化病学分会2000年并冈山会议标准,经胃镜和病理活检确诊,排除心、肝、脾、肺、肾系等疾患。于(
6、早8:30一11:oo)经胃镜下诊断也符合纳入标准后,胃镜下钳夹胃窦部(距幽门口2-3cⅢ)粘膜组织4至5块,取1-2块置于lo%福尔马林液中各做病理切片,其余马上置于RNAIATER中,液氮保存,以备制作表达谱芯片BiostarH-140s。3、临床病例资料分析:对临床所取胃粘膜的若干病人的一般临床资料及症状体征等进行分析,以期发现症状体征的关联性,比较慢性胃炎脾虚证与湿热证之间的症状差异,并对脾虚证进行程度分级,寻找对脾虚证程度分级有诊断意义的症状体征。4、总刚A提取将液氮保存的样品用碾钵碾磨成粉末状后,
7、转移至已经加入适量UNLzol试剂的匀浆管中匀浆。将匀浆液4℃,12000g,离心10min。小心吸取上清液,15-30℃放置5min。加入氯仿,震荡,15-30℃放置3mill,4"0,12000g,离心15mill。吸取上清,加入异丙醇,充分混匀,15--30℃,放置10rain,4.0,12000g,离心10rain。弃去上清,缓慢加入75%乙醇5ml,洗涤,小心弃去乙醇。再加入75%乙醇10ml,短暂涡旋,4.0,8000g离心10mill。小心弃上清,短暂离心,吸去上清,干燥沉淀5min。加入RNa
8、se-free的MiUi.Q水,完全溶解RNA沉淀后,取适量时峪采用核酸定量分析仪和琼脂糖凝胶电泳检测质量,余.∞℃保存。5、探针标记按照UNIGENE芯片杂交试剂盒说明书操作如下:将配制好的预杂交液放入95℃水浴锅内交性2mill,将待预杂交的玻片放入95℃水浴锅内变性30scc。将预杂交液加到玻片内,放入杂交箱内42℃预杂交5~6hr。依次加入以下试剂(反应终体积为50IIl,以下试剂均为RNa
此文档下载收益归作者所有