mDRA6与热疗对肝癌SMMC7721细胞协同作用的研究

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1、河南大学博士学位论文mDRA-6与热疗对肝癌SMMC-7721细胞协同作用的研究姓名：席子明申请学位级别：博士专业：高分子化学与物理指导教师：沈倍奋20100506柚卧-6与热疗对肝癌SUliC-7721细胞协同作用的研究置显微镜堋×400观察细胞形态变化，采用MTT法检测细胞增殖，Annexinv／Pi染色流式细胞仪检测细胞凋亡，抗DR5抗体366EC和FITC一羊抗鼠IgG处理细胞，流式细胞仪检测细胞DR5表达和Fluo-3／AM负载细胞检测胞内Ca2+浓度(平均荧光强度，MFI)的变化。MT

2、T法检测抗人DR5单克隆抗体单独或联合应用顺铂或热疗对肝癌SMMC一7721细胞体外增殖的抑制作用；流式细胞仪检测不同药物对SMMC一7721细胞凋亡的影响。4结果热疗可导致肿瘤细胞形态改变，表现为细胞变小、变圆、脱落、出现空泡：热疗可抑制细胞增殖，细胞热疗1h后0h、6h、12h、24h细胞抑制率分别为：22．18％，26．76％，31．30％，36．62％。细胞凋亡率：细胞热疗1h后0h、6h、12h、24hAnnexinV／PI双染，热疗后0h细胞凋亡率为15％，其中早期凋亡率为2％，晚期凋

3、亡率为13％；热疗后6h细胞凋亡率为65．45％，其中早期凋亡率为43．23％，晚期凋亡率为22．22％；热疗后12h，细胞凋亡率为12．32％，其中早期凋亡率为4．6％，晚期凋亡率为7．72％；热疗后24h细胞凋亡率为22．58％，其中早期凋亡率为7．15％，晚期凋亡率为15．43％。细胞热疗1h后0h、4h、8h、12h、24h细胞内钙离子浓度(平均荧光强度，MFI)分别为：18．13+_0．20、13．44+_0．84、7．87±3．35、13．Ol±2．38、37．24±1．31，对照组为

4、14．28±3．65。细胞热疗lh后0h、6h、12h、24h细胞膜DR5表达率分别为：79．74％、83．22％、91．28％、92．52％，对照组为83．02％。未经热处理细胞增殖抑制率分别为：顺铂组32％；m-DRA-6组22％；顺铂与m-DRA-6联合组37％。热处理细胞增殖抑制率分别为：顺铂组58．06％；m-DRA一6组14．52％；顺铂与m-DPA一6联合组91．13％。细胞凋亡：未经热处理：顺铂组13．53％；m_DRA一6组13．66％1顺铂与m—DRA一6联合组84．24％。热

5、处理组：对照组9．41％，顺铂组30．27％％，m-DRA一6组57．52％，顺铂与m—DRA一6联合组91．33％。5结论疗可提高肝癌SMMC一7721细胞膜DR5的表达，可提高肝癌S删C一7721细胞内Ca2+；肿瘤细胞凋亡与细胞膜DR5的高表达、细胞内Ca2+的增加有关；细胞内ca2+的增加可能是热疗致肿瘤细胞晚期凋亡的主要原因。抗人DR5单克隆抗体可增加化疗药物抗肿瘤作用，热疗与抗人DR5单克隆抗体和化疗药物有协同作用；热疗不仅可显著增加肿瘤细胞凋亡，还可增加抗人DR5单克隆抗体和化疗药物

6、的抗肿瘤细胞作用。【关键词】热疗／DR5／mD融吣6，sMMc一7721细胞／肝癌河南大学研究生博士学位论文英文摘要SynergisticeffectofmDRA-6andthermotherapyonhepatocarcinomacelllineSMMC一7721BackgroundHyperthermiaoftumorisaneffectiveandbrand-newtherapyfollowingthesurgery,radiotherapyandchemotherapy．Neverthel

7、ess，themechanismisstillelusive．Recently,ithasbeenaresearchhotpointowingtothecontinuousrenovationofequipmentsandtherapidprogressoftechnologyforhyperthermia．Hyperthermiaisoneofthepowerfulmethodsforcombinedtherapyoftumoraswellassurgery,chemotherapyandbio

8、logicaltherapy,approvedbyUSFoodandDrugAdministration(FDA)in1985．TheChineseMinistryofPublicHealthissued‘‘StandardRegulationsofTechnologyontheManagementofHyperthermiaforDeeperandWholeBodyTumor'’inNov．2009．mDRA一6isafunctionalmonoclonalantibodyaga