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1、粮食真菌毒素酶联免疫试剂盒应用测试情况第36卷2011年12月掉飧钟技侄清GPaUN~IENCE^ND-~CHNOLOGYANDECONOMYVoI.36Dec.2O11粮食真菌毒素酶联免疫试剂盒应用测试情况熊宁,刘坚,杨卫民,倪姗姗,吴莉莉,王艳,王佳雅4,李皖光,焦志培(1.湖北省粮油食品质量监测站,湖北武汉430061;2.国家粮食局标准质量中心,北京100037;3.宜昌市粮油食品质量监督检测中心,湖北宜昌443000;4.北京市粮油食品检验所,北京100162;5.安徽省粮油产品质量监督检测站,安徽合肥230031;6
2、.河南省粮油饲料产品质量监督检验站,河南郑州450008)[摘要]对市售的不同厂家真菌毒素酶联免疫试剂盒检测粮食中不同真菌毒素含量的样品,研究分析了国内市场上有关试剂盒的稳定性,检测结果的精密度和准确性.测试结果表明,同一品牌试剂盒不同批次间的结果差异最大可达40%~X上,批次问的结果差异50%~2Z上在O～≤10%的试剂盒占测试试剂盒品牌的1/3～1/2;试剂盒孔板间结果差异最大达50%v;t上,孔板间结果差异5O%以上在0～≤20%的试剂盒占测试试剂盒品牌的1/2～4/5;试剂盒的检测结果与液相定值间的相对相差50%以上在0
3、～≤20%的试剂盒只占测试品牌的l/8～1,3.试剂盒与液相结果间存在一定偏差,所有试剂盒均存在一定程度的假阳性.[关键词]粮食;真菌毒素;试剂盒;应用测试目前粮食中常见的真菌毒素主要是黄曲霉毒素B.(AFB.),脱氧雪腐镰刀菌烯醇(呕吐毒素,DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)等.收获粮食和库存粮食的真菌毒素检测往往批量大,时间紧.为此,一般试验室往往用酶联免疫试剂盒进行筛选.由于市供酶联免疫试剂盒厂家较多,技术分级不同,操作方法不同,不同试剂盒测定结果是否存在偏差,与液相色谱方法的偏差是多少,是选用试剂盒首先面临的问题.通过对目
4、前国内市场上供应的常见粮食真菌毒素检测试剂盒进行测试,研究分析了试剂盒测试结果的稳定性,精密度和准确性,以及按照GB2715—2005《粮食卫生标准》中各种真菌毒素限量要求,试剂盒在标准限量值时的误判率.1材料与方法1.1材料与仪器AFB.含量呈梯度的稻谷,玉米样品;DON含量呈梯度的小麦样品和ZEN含量呈梯度的小麦样品:国内市场上供应的9个不同厂家的试剂盒,每个厂家2个批次(市场上随机购买):SUNRISE酶标仪和R—BIOPHARM酶标仪;Agilentl100型高效液相色谱仪.1.2实验过程1.2.1样品中真菌毒素含量的定
5、值由3个国家粮食质量监测中心.分别用国标规定的高压液相法.对不同含量(国家标准允许值上下4个梯度)的AFB.,DON和ZEN粮食样品进行检测定值.经数据分析,测试用样品真菌毒素含量见表1.1.2-2试剂盒的稳定性测试同时用每个厂家2个批次的试剂盒对表1中的相应真菌毒素样品进行检测,以测试试剂盒的稳定性.用同试剂盒不同批次间测得的样品真菌毒素平均值的相对相差表示其稳定性.表1测试用样品液相检测结果注:不同AFB-含量玉米样,有5个浓度的样是由高浓度的样与低浓度样配制而成.含量21.0~g/kg,22.0~g/kg的样是加标样.1.
6、2.3试剂盒的精密度与准确性测试每个厂家试剂盒任选一个批次.对表1中样品进行检测,每个样进行三平行试验(样品提取1次,平行点板3次),测试试剂盒的精密度和准确性.每种试剂盒的精密度用三平行实验极差相对相差表示.准确性用平均值与液相值的相对相差表示.1.2.4试剂盒在标准限量值时的误判率每种毒素选择国家标准允许值附近的8个样品.用每种真菌毒素筛选出的3个稳定性,精密度及准确性较好的厂家试剂盒进行检测,以考察试剂盒在国家标准允许限量值时的误判率.2结果分析2.1试剂盒的稳定性对3种毒素各厂家试剂盒的检测数据进行分析.将各试剂盒不同批
7、次检测结果稳定性情况汇于表2.各试剂盒检测结果精密度情况汇于表3,与液相值比的相对相57第36卷2011年12月熊宁等:粮食真菌毒素酶联免疫试剂盒应用测试情况表2各试剂盒不同批次检测结果稳定性情况注:稳定性级别即批次平均值的相对相差在O～≤10%定为一:在>10%～≤20%定为二;在>2O%～≤30%定为三;>3O%～≤4O%定为四;>4O%定为五.差.即准确性情况汇于表4.根据表2数据分析,8个厂家AFB.试剂盒中只有3个厂家试剂盒,不同批次测定样品,有60%以上的概率批次结果平均值的相对相差在0～≤1
8、0%,即稳定性级别为一级:有一个厂家试剂盒批次问结果平均值的相对相差>40%时的概率达到37.5%.7个厂家DON试剂盒中只有3个厂家试剂盒.不同批次测定样品,有50%以上的概率批次结果平均值的相对相差在0～≤1O%,即稳定性级别为一级:除一个厂家试剂盒批
