土壤中分解尿素的细菌的分离与计数定稿ppt

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1、课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、课题背景1、尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶CO(NH2)2脲酶+CO22NH3+H2O硝化细菌是指能够氧化无机氮化物,从中获取能量,从而把二氧化碳合成为有机物的一类细菌。硝化细菌合成有机物的过程表示如下：2NH3+3O2→(硝化细菌)2HNO2+2H2O+能量2HNO2+O2→(硝化细菌)2HNO3+能量6CO2+6H2O→(能量)C6H12O6NH3既是硝化细菌的氮源，也是其能源。思考：硝化细菌

2、的新陈代谢类型是什么？1、实验室中微生物的筛选原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。什么是选择性培养基？P22页2、方法：利用选择培养基分离二、筛选菌株15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNa2HPO41.4gKH2PO43、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：①从物理性质看此培养基属于哪类？固体培养基②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺

3、乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。4、培养基选择分解尿素的微生物的原理1、显微镜直接计数：利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积样品中微生物的数量。㈡.统计菌落数目：利用血球计数板在显微镜下计数是常用的一种微生物计数法显微镜直接计数法其原理与计数板的构造有关每块计数板上有两个计数室（正方形），盖上盖玻片后容积是一定的（0.1mm3），深为0.1mm，边长为1mm，其上面有精确的刻度。其刻度一般有两种规格16个中方格，每个中方格分25个小格16×2525个中方格，每个中方格分16个小格25×16计数室我们采用的是25×16的，计数

4、时查5个小方格的总菌数。如图：计算：1个计数室的总菌数=A/5×25×B1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×16×1000×B=50,000A×B个5个方格的总菌数稀释倍数每毫升原液所含细菌总数=每小格平均细菌数×400×1000×稀释倍数注：400=25×16，表示400个小格，1000表示1mL=1㎜3取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖盖玻片。取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。用10×物镜观察并将计数室移至视野中央。在10×物镜下计数：计数4个（或5个）小格的菌体总数，然后求得平均值。乘上400就得出计数区总菌数

5、，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。注意事项：计上不计下，计左不计右。实验步骤：不能区分死菌与活菌；缺点：2.间接计数法（活菌计数法）⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。⑵常用方法：每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。稀释涂布平板法。（3）计算：计算公式：每克样品中的菌株数=（C÷V）×M例、某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布

6、平板时所用稀释液的体积为0.1ml）()A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.4B注意事项①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。②为使结果接近真实值，更具说服力，可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板，培养后计算出菌落平均数。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。（为什么）例2、自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题：步骤如下：a、制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液；b、为了得到更加准确的结果

7、，应选用法接种样品；c、适宜温度下培养。结果分析：（1）测定大肠杆菌菌落数时，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，与事实更加接近的是（）A、一个平板，统计的菌落数时230个B、两个平板，统计的菌落数分别为220和260，取平均值为240C、三个平板，统计的菌落数分别为21、212和256，取平均值为163D、四个平板，统计的菌落数分别为210、260、240和250，取平均值为240稀释涂布平板法D（2）某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上菌落数的平均值为212，那么每毫升样