dxi800培训dxi原理及定标

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1、DxI800原理概述概述DxI800是目前世界上最先进,效率最高的全自动化学发光分析仪用于多种体液微量物质的定量、半定量以及定性试验采用顺磁性颗粒,碱性磷酸酶激发的AMPPD,RV穿梭系统,试剂盒覆膜技术等分析技术的关键点分析模式检测技术分离技术免疫标记物发展放射性同位素(Radioisotopes)-RIA优秀的灵敏度,抗干扰能力好效期短,重现性差,手工操作,分析时间长,污染物的处理等荧光素(Fluorophores)-FIA稳定,较好的灵敏度和重现性其它荧光物的干扰,线性范围窄酶(Enzymes)-EIA非常容易使用对定量分析所要求的灵敏度和宽线性难以实现化

2、学发光物质-CLEIA优秀的灵敏度和宽线性,抗干扰能力好类型–闪烁型(flash),辉光型(glow)稳定性依据分子结构会有不同表现试剂效期开瓶效期定标周期目前常见的免疫分析发光物质鲁米那:1928年,早期开发的发光标记物吖啶酯:直接化学发光,闪烁型吖啶甲酰胺:直接化学发光,闪烁型三联吡啶钌:电化学发光,闪烁型AMPPD:酶促化学发光,辉光型AMPPD化学发光系统+*光子(477nm)APOOOCH3OPO32-O-OOOCH3OO-OOCH3为什么Beckman采用AMPPD3-(2-螺旋金刚烷-4-甲氧基-4-甲基-4-(3-磷酸氧基)-苯基-1,2-二氧乙

3、烷(AMPPD)为什么Beckman采用AMPPDP.A.Boninietal.“Immunoassaysystems”标记物类型标记物名称可达到的检测限(/L)放射性同位素3H5x10-15mole125I5x10-17mole酶Beta-galactosidase1.5x10-16mole Horseradishperoxidase3x10-16mole Alkalinephosphatase5x10-17mole生物发光Fireflyluciferin/luciferase5.6x10-16photons/min/mg Enzymeenhanced10-1

4、9mole Fireflyluciferin/luciferase10-19mole荧光Europium(III)ion2x10-17moleFluorescein10-13mole酶/chemiluminescencePeroxidase/luminol/enhancer<10-15mole Glucose-6-phosphatedehydrogenasepeoxidase/10-18moleisoluminol*AMPPD10-21mole时间发光信号辉光坪区闪光尖峰为什么Beckman采用AMPPDAMMPPD良好的辉光特性,发光稳定时间可达1小时,检测方

5、便稳定。磁微粒子直径0.08+/-0.02mm,接触面积大快速的反应动力学较少的样品量提高检测的灵敏度极好的批内重现性可以探针取放,实现自动化有磁性磁颗粒均匀的悬浮于整个反应体系分析物在磁颗粒表面捕获磁颗粒在磁场中被清洗磁颗粒重新悬浮十分容易清洗QSDisp#1MagAsp #1MixDisp#2MagAsp #2MixDisp#3MagAsp #3Mix Add SubIncu- bateRead4minutes10x1sec.6minutes分析模式分析模式-有很多种方式可定义为分析的“处方”设定一个最优化的模式(可变量)去最优化项目的临床应用分析模式的变化

6、可变量夹心法(Sandwich)vs.竞争法(competitive)标记物的放置同步(Simultaneous)vs.分步(sequential)试剂/样品加入的顺序孵育的次数(步骤)清洗分离的次数(步骤)试剂/样品的体积/浓度孵育的时间孵育的温度DxI800的分析模式基本分析模式夹心法(Sandwich)竞争结合(Competitivebinding)试剂的加入同步(Simultaneous)(1步,1次清洗)分步(Sequential)(2步,2次清洗)“Piggyback”(2步,1次清洗)夹心法分析模式捕捉抗体(Captureantibody)和标记抗

7、体(labeledantibody)每个抗体的存在可以与更多的分析物发生反应分析更可靠,精确,准确和可重现性分析更灵敏因为所有分析物都参与反应每个抗体的不同可以针对不同的抗原决定簇,或二个在同一个抗原决定簇分析更特异因为二个抗体同时反应适合与检测大分子物质,分子量大有更多的特异性抗原决定簇可选择bhCGhTSHIgEProlactinhFSHhLHFerritinTnI一步三明治法两步三明治法夹心法定标RLU随浓度增加而增加SI GNALCONCENTRATIONLoglinearscale竞争法分析模式只有捕捉抗体主要针对小分子物质检测没有足够表面积的分析物去

8、符合“夹心法”要求一定量

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1、DxI800原理概述概述DxI800是目前世界上最先进,效率最高的全自动化学发光分析仪用于多种体液微量物质的定量、半定量以及定性试验采用顺磁性颗粒,碱性磷酸酶激发的AMPPD,RV穿梭系统,试剂盒覆膜技术等分析技术的关键点分析模式检测技术分离技术免疫标记物发展放射性同位素(Radioisotopes)-RIA优秀的灵敏度,抗干扰能力好效期短,重现性差,手工操作,分析时间长,污染物的处理等荧光素(Fluorophores)-FIA稳定,较好的灵敏度和重现性其它荧光物的干扰,线性范围窄酶(Enzymes)-EIA非常容易使用对定量分析所要求的灵敏度和宽线性难以实现化

2、学发光物质-CLEIA优秀的灵敏度和宽线性,抗干扰能力好类型–闪烁型(flash),辉光型(glow)稳定性依据分子结构会有不同表现试剂效期开瓶效期定标周期目前常见的免疫分析发光物质鲁米那:1928年,早期开发的发光标记物吖啶酯:直接化学发光,闪烁型吖啶甲酰胺:直接化学发光,闪烁型三联吡啶钌:电化学发光,闪烁型AMPPD:酶促化学发光,辉光型AMPPD化学发光系统+*光子(477nm)APOOOCH3OPO32-O-OOOCH3OO-OOCH3为什么Beckman采用AMPPD3-(2-螺旋金刚烷-4-甲氧基-4-甲基-4-(3-磷酸氧基)-苯基-1,2-二氧乙

3、烷(AMPPD)为什么Beckman采用AMPPDP.A.Boninietal.“Immunoassaysystems”标记物类型标记物名称可达到的检测限(/L)放射性同位素3H5x10-15mole125I5x10-17mole酶Beta-galactosidase1.5x10-16mole Horseradishperoxidase3x10-16mole Alkalinephosphatase5x10-17mole生物发光Fireflyluciferin/luciferase5.6x10-16photons/min/mg Enzymeenhanced10-1

4、9mole Fireflyluciferin/luciferase10-19mole荧光Europium(III)ion2x10-17moleFluorescein10-13mole酶/chemiluminescencePeroxidase/luminol/enhancer<10-15mole Glucose-6-phosphatedehydrogenasepeoxidase/10-18moleisoluminol*AMPPD10-21mole时间发光信号辉光坪区闪光尖峰为什么Beckman采用AMPPDAMMPPD良好的辉光特性,发光稳定时间可达1小时,检测方

5、便稳定。磁微粒子直径0.08+/-0.02mm,接触面积大快速的反应动力学较少的样品量提高检测的灵敏度极好的批内重现性可以探针取放,实现自动化有磁性磁颗粒均匀的悬浮于整个反应体系分析物在磁颗粒表面捕获磁颗粒在磁场中被清洗磁颗粒重新悬浮十分容易清洗QSDisp#1MagAsp #1MixDisp#2MagAsp #2MixDisp#3MagAsp #3Mix Add SubIncu- bateRead4minutes10x1sec.6minutes分析模式分析模式-有很多种方式可定义为分析的“处方”设定一个最优化的模式(可变量)去最优化项目的临床应用分析模式的变化

6、可变量夹心法(Sandwich)vs.竞争法(competitive)标记物的放置同步(Simultaneous)vs.分步(sequential)试剂/样品加入的顺序孵育的次数(步骤)清洗分离的次数(步骤)试剂/样品的体积/浓度孵育的时间孵育的温度DxI800的分析模式基本分析模式夹心法(Sandwich)竞争结合(Competitivebinding)试剂的加入同步(Simultaneous)(1步,1次清洗)分步(Sequential)(2步,2次清洗)“Piggyback”(2步,1次清洗)夹心法分析模式捕捉抗体(Captureantibody)和标记抗

7、体(labeledantibody)每个抗体的存在可以与更多的分析物发生反应分析更可靠,精确,准确和可重现性分析更灵敏因为所有分析物都参与反应每个抗体的不同可以针对不同的抗原决定簇,或二个在同一个抗原决定簇分析更特异因为二个抗体同时反应适合与检测大分子物质,分子量大有更多的特异性抗原决定簇可选择bhCGhTSHIgEProlactinhFSHhLHFerritinTnI一步三明治法两步三明治法夹心法定标RLU随浓度增加而增加SI GNALCONCENTRATIONLoglinearscale竞争法分析模式只有捕捉抗体主要针对小分子物质检测没有足够表面积的分析物去

8、符合“夹心法”要求一定量

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