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1、AnimalProtocol：_____________动物实验福利与伦理审查表申请日期：2016年10月8日申请人姓名（PI）李XX申请人单位江南大学食品学院PI联系方式1234456578导师姓名/联系方式张XX/1456789890课题名称XX菌缓解小鼠急慢性锰毒性的效果评价课题性质中国第58批博士后基金“XXXX”使用动物情况品种品系C57BL/6小鼠动物来源上海斯莱克实验动物有限公司等级SPF规格6~8周龄数量（只）104♀（只）0♂（只）104计划进驻日期2016年X月X日计划结束日期2016年X月X日实验目的：XX

2、菌缓解小鼠急慢性锰毒性的效果评价的研究实验分组与处理：1.XX菌缓解小鼠急性锰中毒效果评价（约11月中旬结束）本阶段预计11月初进行，11月中旬结束，然后进行样本取材和各种指标的测试，预计两周时间完成后续测试实验。组别分组描述小鼠数量（只）治疗组对照组1天自由饮用蒸馏水，1-2天灌胃0.2mLPBS复溶的13%脱脂乳作为对照8锰造模组1天灌胃0.2mL锰水（氯化锰溶于饮用水中，使每只小鼠摄入剂量为250mg/kg），1-2天灌胃0.2mLPBS复溶的13%脱脂乳8锰+活7661天灌胃0.2mL锰水（氯化锰溶于饮用水中，使每只小鼠

3、摄入剂量为250mg/kg），1-2天灌胃小鼠1×109cfuXX菌766活菌粉悬浮液（0.2mL）8锰+死7661天灌胃0.2mL锰水（氯化锰溶于饮用水中，使每只小鼠摄入剂量为250mg/kg），1-2天灌胃小鼠0.2mLXX菌766死菌粉悬浮液（与活菌粉同重量）8锰+活4561天灌胃0.2mL锰水（氯化锰溶于饮用水中，使每只小鼠摄入剂量为250mg/kg），1-2天灌胃小鼠1×109cfuXX菌766活菌粉悬浮液（0.2mL）8预防组对照组1-7天灌胃0.2mLPBS复溶的13%脱脂乳作为对照，8天灌胃小鼠0.2mL普通饮用

4、水8锰造模组1-7天灌胃0.2mLPBS复溶的13%脱脂乳，8天灌胃0.2mL锰水（氯化锰溶于饮用水中，使每只小鼠摄入剂量为250mg/kg）8锰+活7661-7天灌胃小鼠1×109cfuXX菌766活菌粉悬浮液（0.2mL），8天灌胃0.2mL锰水（氯化锰溶于饮用水中，使每只小鼠摄入剂量为250mg/kg）8锰+死7661-7天灌胃小鼠0.2mLXX菌766死菌粉悬浮液（与活菌粉同重量），8天灌胃0.2mL8锰水（氯化锰溶于饮用水中，使每只小鼠摄入剂量为250mg/kg）2.XX菌766缓解小鼠慢性锰中毒效果评价（约12月底结

5、束）本阶段预计11月上旬进行，12月下旬结束，然后进行样本取材和各种指标的测试，预计两个月时间完成后续测试实验。分组名称分组描述小鼠数量（只）对照组每天灌胃0.2mLPBS复溶的13%脱脂乳作为对照8锰造模组每天灌胃0.2mLPBS复溶的13%脱脂乳；将氯化锰溶于饮用水中使其浓度达0.6mg/mL,供小鼠自由饮用8仅灌胃766每天灌胃小鼠1×109cfuXX菌766活菌粉悬浮液（0.2mL），自由饮用蒸馏水8锰+766每天灌胃小鼠1×109cfuXX菌766活菌粉悬浮液（0.2mL），将氯化锰溶于饮用水中使其浓度达0.6mg/m

6、L,供小鼠自由饮用8实验方法：将XX菌采用灌胃(1×109cfu/0.2mL/只/天)的方式到小鼠体内。乳酸菌处理方法为将冻干菌粉用PBS缓冲液复溶，菌浓度约1×109cfu/0.2mL，每只小鼠每天灌胃0.2mL。模型构建：在急性锰中毒实验中，在治疗组中，对照组自由饮用蒸馏水，锰中毒实验组采用灌胃0.2mL锰水（氯化锰溶于饮用水中，使每只小鼠摄入剂量为250mg/kg），然后针对不同的组别灌胃XX菌766活菌、鼠李糖乳杆菌CCFM492活菌及XX菌766死菌。预防实验组中，针对不同组别先灌胃XX菌766活菌及XX菌766死菌，

7、然后再灌胃0.2mL锰水（氯化锰溶于饮用水中，使每只小鼠摄入剂量为250mg/kg）[1]。在慢性锰毒性试验中，对照组自由饮用蒸馏水，锰中毒实验组采用灌胃0.2mL锰水（氯化锰溶于饮用水中使其浓度达0.6mg/mL,供小鼠自由饮用），然后针对不同的组别灌胃XX菌766菌及灌胃XX菌766菌和锰水八周[2]。测定指标：（1）小鼠粪便、皮毛及组织（肝脏、肾脏及脑）中金属元素锰的测定收集小鼠粪便时，一只小鼠一个代谢笼进行粪便的收集。（2）小鼠血液、尿液及组织中生理指标测定。如小鼠血液中ALT和AST活性；肝脏、肾脏及脑中MDA和GSH

8、含量以及SOD、GPx和CAT活性的测定，脑内苯并-α-芘羟化酶和7-乙氧基香豆素去乙基酶活性；尿液中N-乙酰-β-D葡萄糖苷酶活性及锰含量测定[3]。（3）小鼠肝脏、肾脏及脑组织切片观察。实验结束后动物处理方法:采用浓度为1％的戊巴比妥钠溶液对小鼠进行腹腔注射