现代微生物学实验技术课程论文

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1、现代微生物学实验技术课程论文实验一、耐高盐菌的分离与纯化1、实验目的1、认识并了解土壤微生物物种的多样性;2、分离纯化土壤环境中耐盐的菌株。2、实验方法2.1实验器材与试剂恒温振荡培养箱;显微镜;超净台;灭菌锅;锥形瓶;培养皿;结晶紫染色液;液体培养基:牛肉膏5g/L,蛋白胨10g/L;固体培养基:牛肉膏5g/L,蛋白胨10g/L,琼脂条20g/L;2.2实验步骤2.2.1土壤的制备:选择高盐的土壤区域,去表层土,挖5-20cm深度的土壤数10g,装入已灭菌的牛皮纸袋。2.2.2培养基的配制与灭菌:液体培养基200ml

2、,分装为4瓶,每瓶50ml,固体培养基100ml。灭菌:121°C,20min,高压蒸汽灭菌。灭完菌后取出,两瓶50ml的液体培养基中各加入15%的NaCl,另外两瓶50ml的液体培养基中各加入5%的NaCl,混匀。同时将固体培养基取出倒平板。2.2.3耐盐微生物的富集:分别在NaCl浓度为5%,15%的50mL液体培养基中加入相同量5g的土壤,28℃、150r/min摇床培养。培养富集4天后,从富集一代的培养液中吸取5%的菌液到新的NaCl浓度为5%,15%的液体培养基中继续富集培养3天。2.2.4耐盐微生物的分离纯

3、化:取NaCl浓度为5%,15%富集培养的培养物镜检(结晶紫染色),发现NaCl为5%的浓度下的菌更密集,挑取该浓度的菌液,进行划线分离,得到纯培养物后再挑取两种不同的菌落再次划线分离,从而得到单菌落。3、实验结果通过对高盐土壤中微生物的富集及分离纯化,得到如下图两株菌株,命名为L-1、L-2。菌株L-1产黄色色素,菌落呈黄色,圆形,表面光滑,边缘整齐,菌株L-2产橘红色色素,菌落呈橘红色,圆形,表面光滑,边缘不整齐。实验二、耐盐菌的形态学及生理生化反应1、实验目的1、从形态学特点对耐盐菌株进行初步鉴定;2、对耐盐菌株

4、进行生理生化实验,进一步鉴定菌株。2、实验原理形态学鉴定是菌种鉴定中最简单、最初步也是最直观的鉴定方法。包括可以通过肉眼观察菌落特征、显微镜观察菌株细胞结构以及革兰氏染色等方法,都是形态学鉴定中比较常用的方法。微生物细胞在酶的催化下进行各种各样的生理生化反应。把微生物细胞在一定条件下培养,通过观察生理现象和检查代谢产物,可以了解微生物的代谢过程和特点。由于不同微生物可能具有不同的酶,代谢途径和代谢产物可能也有所不同,生理生化反应是微生物鉴定分类鉴定的重要指标之一。糖发酵实验:微生物具有不同的利用各种碳源的能力,其原理在

5、于不同微生物具有不同的酶系。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大差异。有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和气体(如氢气、甲烷、二氧化碳等),有些细菌只产酸不产气。石蕊牛乳试验:石蕊是在中性时呈粉红色;碱性是呈蓝色;还原时,则自下而上使牛奶褪色还原成白色。乳酸细菌发酵乳糖产酸,石蕊变红,当酸度很高时,可使牛奶凝固。如试验菌产生蛋白酶,使酪蛋白分解,则使牛奶变得较澄清略透明,表明牛奶已胨化。3、实验方法3.1实验器材与试剂恒温培养箱;显微镜;超净台;灭菌锅;试管;0.6

6、%Agar半固体培养基;革兰氏染色试剂;LB液体培养基:牛肉膏5g/L,蛋白胨10g,NaCl10g/L;糖发酵试验小管;石蕊牛乳实验试管培养基;菌株L-1、L-2、E.C、B.S3.2实验步骤3.2.1对数期菌液的制备:分别挑取菌株L-1、L-2的单菌落接种于3ml的LB液体培养基中,37°C恒温振荡培养箱中培养16h。3.2.2革兰氏染色:将菌株L-1、L-2分别涂片---固定---2%结晶紫1min,水洗擦干--碘液1min,水洗擦干---95%乙醇洗脱25s---水洗擦干---复红染色1min---水洗擦干--

7、-镜检(分别用E.C和B.S做对照)3.2.3游动性检测:将L-1、L-2分别用接种针穿刺接种至0.6%Agar半固体培养基(B.S做对照),37°C恒温振荡培养箱中培养16h。3.2.4生理生化反应:①糖发酵试验(产酸产气):用接种环分别挑取第二次划线分离的菌落L-1、L-2,接种于糖发酵装置小管中,并分别接种E.C和B.S做为对照实验,接种后装置小管倒置,37℃恒温培养箱,培养2d后观察结果。②石蕊牛乳实验(利用蛋白质酪素的能力):分别在石蕊牛乳培养基中接种耐盐菌株L-1、L-2、E.C和B.S,放置于37℃恒温培

8、养箱,两周时间左右观察结果。3.2.5芽孢的观察:分别挑取菌落L-1、L-2中心菌体(要的是划线分离已生长3-4天的平板)---涂片固定---镜检(对照B.S)(注:芽孢为不着色、透明中空、圆形或椭圆形)3.2.6荚膜的观察:直接观察菌落1、实验结果通过一系列的生理生化鉴定发现菌株L-1为革兰氏阳性的球菌,具有鞭毛,无芽孢也无荚膜

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