实验室设置及一般技术(2学时)

《实验室设置及一般技术(2学时)》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第二章植物细胞工程实验室设置及一般技术一．实验室设置细胞工程实验室它必须满足三个基本的需要，即：实验准备，包括培养基配制，洗涤与灭菌等；无菌操作；控制培养。1．基本实验室（1）准备室：准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。要求宽敞明亮，通风条件好。（2）接种室：接种室的功能是进行无菌操作。要求封闭性好，干燥清洁，能较长时间保持无菌。房间一般不宜过大，其规模根据实验需要而定。接种室除了出入口和通气口外，应行密闭。（3）培养室培养室的功能是对离体材料进行控制培养。其首要要求是要能控制光照和温度，

2、其次为防止微生物感染，有的还需要有可调节的空气湿度。培养室应保持干燥和清洁。准备室,宽敞明亮,通风效果好.无菌室,封性好,干燥清洁,保持无菌,应防空气对流培养室,控温,控光,空气干燥清洁2．辅助实验室（1）细胞学实验室：其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。（2）摄影室及暗室：其功能是进行培养材料的摄影记录和胶片冲印。在有条件的情况下可建立此实验室。（3）生化分析室在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养

3、物的有效成分随时进行取样检查。细胞工程实验室布局的其基本要求是：便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察。二．实验室所需的设备、用具1．基本设备：冰箱、天平、酸度计、纯水器、电炉、培养基分装器、搅拌器。2．灭菌设备：蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。3．无菌操作设备：净化工作台、接种箱。4．光温控制设备：时间程序控制器、空调及温度感应器。5．细胞培养设备：培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、摇床、生物反应器等。6．细胞学鉴定设备：光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜

4、。除上述基本设备外，如果有条件和需要还可配制摄影设备、生化分析设备等。7.培养器皿及实验用具玻璃器皿：新型材料器皿：玻璃漏斗、量筒、试管、锥形瓶、吸管、烧杯、试剂瓶等金属材质用具：剪刀、镊子（弯头、平头）、眼科剪、眼科镊、滤器等。三.常用技术（一）洗涤技术植物组织培养最重要的，也是最基本的要求，就是各项操作都应从无毒害、无污染的培养环境来考虑。培养过程中最经常、最大量的工作之一，是洗涤培养瓶及其它常用器皿。在清洗器皿处应有较大的水池，水池应用水泥制作，白瓷砖砌内外表面，池底另放一张橡胶垫，以减少器皿

5、破损。自来水龙头宜采用三孔鹅颈式的，用水方便，并在需要时可加装抽滤器。下水道应畅通，以免妨碍工作。除水池外，还需辅助以若干盆与桶。洗瓶时先将瓶子在清水中泡一会儿，然后在水龙头下涮去瓶内污物，沥干水，泡入浓洗衣粉水中，再用瓶刷沿瓶壁上下刷动和呈圆周旋转两个方向刷洗。瓶外也要刷到，不要留下未刷到之处。刷后放到水龙头下用流水冲刷4次，以彻底冲去洗衣粉残留物。洗好的瓶子应透明锃亮，内外壁水膜均一，不挂水珠，即表示无污迹存在。通常无须乎再用蒸馏水涮一遍，直接放入洁净的大果菜篮中，再置搁架上沥晾水汽，这可能是最

6、省事、最节约又少占空间的办法。也可制作晾洗架，瓶子倒放在孔格中或挂在小木棍上，这样洗后要摆一遍瓶子，用时再收一次瓶子。急等使用的瓶子可以用烘箱烘干。烘时缓慢升温，温度也无须太高。1．洗涤液铬酸洗涤液是用重铬酸钾(K2Cr2O7)与硫酸(H2SO4)配制而成，可根据需要配制成弱、中、强三种。弱：用重铬酸钾50g加入蒸馏水1L，加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸90ml。中：用重铬酸钾50g加入蒸馏水100ml，加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸875ml。强：与浓硫酸加热的同时缓慢加入磨碎的重铬酸钾，直到

7、重铬酸钾达到饱和为止。一般浓硫酸1L加入重铬酸钾50g。2．洗涤方法2.1新玻璃器皿洗涤：先用自来水刷洗，再用5％稀盐酸浸泡，以中和玻璃表面的碱性物质赫其他有害物质。2.2使用过的玻璃器皿的清洗（1）使用过的玻璃器皿应立即浸入清水，避免干涸难洗。（1）洗涤剂洗净后，浸酸性洗液过夜。（2）从酸性洗液捞出后自来水洗净，蒸馏水刷洗3次，凉干后高压灭菌。2.3塑料用品洗涤塑料用品一般用合成洗涤剂洗涤，因其附着力较强，因此冲洗时必须反复多次，最后用蒸馏水冲洗。2.4橡胶用品的清洗：浸泡，2%NaOH煮沸15分

8、钟，流水冲洗，1%HCl浸泡30min，流水冲洗，蒸馏水煮沸20min，三蒸水冲洗2~3次，晾干或烘干。2.5金属用品洗涤金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤，需要清洗时，一般用酒精擦洗，并保持干燥。（二）灭菌、消毒技术我们所指的菌，包括细菌、真菌、放线菌、藻类及其它微生物，这些东西很小，肉眼是根本看不见的，在条件适宜时它们大量孳生，这时能看到它们的集合体或形成的菌落，飘散的孢子等等。菌的特点是无孔不入，无处不有，在自然条件下忍耐力强，生活条件要求简单，繁殖能力极强，不采