changing遗传工程

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1、简答题：1.基因工程的基本过程：①获取目的基因②重组体的制备③重组体的转换④重组体筛选和鉴定⑤外源基因在宿主细胞中的表达2.基因工程的基本原理：①提高外源基因的剂量—分子遗传学原理②筛选修饰重组基因表达的转录调控元件，如启动子、增强子等—分子生物学原理③修饰构建蛋白质生物合成的翻译调控元件-分子生物学原理④基因工程菌（微型生物反应器）的增殖及稳定生产-生化工程学原理。3.DNA重组载体的功能：①为外源基因提供进入受体细胞的转移能力②为外源基因提供在受体细胞中的复制能力或整合能力③为外源基因提供在受体细胞中的扩增和表达能力4.DNA重组载体所具备的的条件：①具有对受体细胞的可

2、转移性或亲和性，以提高载体导入受体细胞的效率②具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点，使得外源基因在受体细胞中稳定遗传③具有多种单一的核酸内切酶识别切割位点，有利于外源基因的剪接插入。5.质粒的分类、用途及区别：①克隆质粒：常用于克隆和扩增外源基因②测序质粒：通常高拷贝复制，含有多酶切口的街头片段，便于各种DNA片段的克隆与扩增③整合质粒：含有整合酶编码基因及整合特异性的位点序列，克隆在这种质粒上的外源基因进入细胞后，能准确地重组整合在受体细胞染色体DNA的特定位点上。④穿梭质粒：含有两个亲缘关系不用的复制子结构以及相应的选择性标记基因，能在两种不同种属的受体细胞中复

3、制检测⑤探针质粒：被设计用来筛选克隆基因的表达调控条件⑥表达质粒：使克隆在合适位点上的任何外援基因均能在受体细胞中高效表达6.λ噬菌体和Cos质粒区别：黏粒重组分子进入受体细胞后，依靠质粒DNA部分的复制子结构进行自主复制，其拷贝数取决于质粒本身的性质，而且由于重组分子失去了体内包装的能力，故其分离纯化只能采用质粒的方法。7.T4-DNA连接酶的生物活性：①修复双链DNA上的单链缺口②连接RNA-DNA杂交双链上的DNA链缺口或RNA链缺口③连接完全断开的两个平头双链DNA分子。8.T4-DNA的修饰性活性：①5’→3’的DNA聚合活性②3’→5’的核酸外切酶活性③无5’→

4、3’的核酸外切酶活性。Ⅰ类酶Ⅱ类酶（最常用于DNA重组）Ⅲ类酶酶分子三亚基双功能酶内切酶和甲基化酶不在一起三亚基双功能酶识别位点二分非对称序列4-6bp短序列，大多数为回文结构5-7bp非对称序列切割位点距离识别位点至少1000bp，无特异性在识别位点中或靠近识别位点在识别位点下游24-26bp处限制反应与甲基化反应互斥分开的反应同时竞争限制作用是否需要ATP需要不需要需要9.Klenow酶的生物活性：①5’→3’的DNA聚合活性，使DNA链在模板的指导下延伸②3’→5’的核酸外切酶活性，其主要功能是识别并切除错配的碱基，保证DNA复制的准确性③无5’→3’的核酸外切酶活性

5、④无核酸内切酶活性10.Klenow酶的副反应即催化活性：①修复由限制性核酸内切酶造成的3’凹端，使之成为平头末端②以含有同位素的脱氧核苷酸为底物，对DNA片段进行标记③用于催化cDNA第二链的合成④用于双脱氧末端终止法测定DNA的序列11.受体细胞的类型及其特点：①限制缺陷型：打破细菌转化的种属特异性，提高任何来源的DNA分子的转化效率。②重组缺陷型：具有依赖于ATP的双链DNA外切酶和单链DNA内切酶双重活性，用于以外源基因克隆、扩增以及表达为目的的基因工程实验。③转化亲和型：利用遗传诱变技术改变受体细胞壁的通透性，提高转化效率④遗传互补型：具有与外源基因表达产物活性互

6、补的遗传特征⑤感染寄生缺陷型：对其他生物具有感染和寄生效应，将重组DNA分子导入后，极有可能随着受体菌的感染寄生作用，进入生物体，并广泛传播。1.以植物为例，常用的转基因方法（14种）①细胞融合②微细胞介导的基因转移③染色体介导的基因转移④脂质体介导的基因转移⑤磷酸钙沉淀介导基因转移⑥原生质体融合术⑦显微注射法⑧电脉冲介导的基因转移⑨重组DNA病毒感染⑩重组RNA病毒感染⑪直接转化法⑫接合转移法⑬超声波法⑭基因枪法每种方法要懂得基因转移大概的原理，不能单纯只知道名字。2.大肠杆菌作为转基因受体的特点：⑴优点：①全基因组测序，共有4405个可读框②基因克隆表达系统成熟完善③繁

7、殖迅速、培养简单、操作方便、遗传稳定④被美国FDA批准为安全的基因工程受体生物。⑵缺点：①缺乏对真核生物蛋白质的复性功能②缺乏对真核生物蛋白质的修饰加工系统③内源性蛋白酶降解空间构象不正确的异源蛋白④细胞周质内含有种类繁多的内毒素3.作为一个真核生物表达系统，酵母的优势：①全基因测序，基因表达调控机制比较清楚，遗传操作简单；②具有原核细菌无法比拟的真核生物蛋白翻译后修饰加工系统；③不含有特异性的病毒，不产生毒素；④大规模发酵工艺简单，成本低廉；⑤能将外源基因表达产物分泌至培养基中；⑥酵母是最简单的真核生物（划线部分