山东省科技发展计划合同书

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1、项目编号：2013YD21006密级：山东省科技发展计划项目合同书项目名称：β-葡聚糖酶的研发及产业化项目主管部门：聊城市科技局项目负责人：刘钦松联系人：郭宝柱联系电话：0635-5055118起止年限：2013年01月至2013年05月山东省科学技术厅制填写说明1．本合同书系省科技厅为组织山东省科技发展计划项目研究而设计，合同书甲方为科技发展计划项目主管部门，乙方为项目承担单位。2．本合同书一式四份，由项目主管部门与项目承担单位签订，项目主管部门一份，项目承担单位一份；省科技厅两份。3．合同书应用钢笔填写或计算机打印填报（A4

2、），字迹要工整清楚。4．项目密级由项目承担单位提出建议，省科技厅项目主管处室认定。一、项目研究目标和主要研究内容（要解决的主要技术难点和问题，研究的创新点和内容等）主要技术难题和问题：1、菌种构建及其选育2、菌种培养条件及其诱导产酶表达3、发酵后期纯化处理工艺优化4、酶喷雾干燥包埋技术项目研究的创新点：1、现在市场上的β-葡聚糖酶大多有霉菌发酵提取得到，本项目的工程菌是毕赤酵母，更近于哺乳动物的真核生物，用其发酵产生的β-葡聚糖酶没有内毒素，而且是美国FDA批准的生物药物生产载体。2、通过将BRP分泌系统克隆整合到表达菌株中，使

3、目的产物β-葡聚糖酶更容易分泌到胞外，避免产物在胞内聚集，也使得后期的分离纯化更简单，易于进行。3、通过培养基和发酵参数优化，该项目的工程菌产生的产物β-葡聚糖酶活力很高，根据β-葡聚糖酶的国际酶活标准，重组毕赤酵母胞外产酶量达到12000IU/mL以上，远高于市场商品酶活。项目的先进性：1、该项目技术已非常成熟，重组毕赤酵母生产β-葡聚糖酶已经完成1000L的中试发酵实验，无需再进行条件摸索，进一步研发，可直接进入生产阶段，节约时间和研发成本；2、公司现有的设备和条件已基本满足该项目的生产，无需再进行大量的投入，节约原始成本；

4、3、现阶段市场对于β-葡聚糖酶酶活规定比较混乱，有的企业采取自己的酶活定义，使酶活不统一，现有市场上的商品酶大约1000～3000IU/mL，该项目重组毕赤酵母胞外产酶量达到12000IU/mL以上，远高于现在市场的产品酶活量；4、该项目产品β-葡聚糖酶分泌到胞外，无需破菌，下游纯化较简单，菌体分离即可得粗酶液，直接用于销售或者喷雾干燥。项目研究内容：本项目将β-葡聚糖酶从枯草芽孢杆菌中获得的β-葡聚糖酶基因（杂交基因）和BRP分泌系统克隆到质粒pLF3和pET中，将β-葡聚糖酶基因经密码子优化后导入重组毕赤酵母，极大地提高了β

5、-葡聚糖酶的耐热度和表达量，并使β-葡聚糖酶分泌到培养基中，胞外产酶量达12000IU/mL以上。结合细胞高密度发酵技术建立和优化发酵β-葡聚糖酶生产工艺；建立和优化β-葡聚糖酶制备下游提取工艺。本研究所的重点是采用细胞高密度发酵技术提高β-葡聚糖酶的表达量。二、项目考核指标〔包括①主要技术指标：如形成的专利、新技术、新产品、新装置、论文专著等数量、指标及其水平等；②主要经济指标：如技术及产品应用所形成的市场规模、效益等；③项目实施中形成的示范基地、中试线、生产线及其规模等；④其它应考核的指标〕①主要技术指标：该项目预期完成后计

6、划申请发明专利2项，发表著作2篇，技术水平达到国际领先，进行大规模生产后可替代进口。②主要经济指标：本项目进行产业化生产建设，一方面能够填补国内市场的需求缺口，解决国内进口价格昂贵的现状，为企业迅速盈利，产生巨大的经济和社会效益；另一方面为打开更为广阔的国际市场提供了先机。本项目技术尖端，研发成功后，将提高β-葡聚糖酶的产量，使之能大范围应用，生产的产品广泛应用于啤酒、饲料、医药、制糖、纺织、造纸和生物防治等行业，带动行业的发展；兼之利用生物方法，能有效保护环境，节能降耗。本项目建成投产后，预期年销售收入可达2844万元，年新增

7、税收711万元，年新增利润1706万元。③项目实施中形成的示范基地、中试线、生产线及其规模等；本项目预期目标：通过基因工程手段构建基因工程菌高密度发酵生产，经分离得到粗酶液，重组毕赤酵母酶活单位可达12000IU/mL，酶活高于市场现有商品酶。达到国内领先水平，建设国际先进水平的β-葡聚糖酶生产与生物发酵基地，进行β-葡聚糖酶的研发、生产和销售一系列的工作。本项目地点位于山东省聊城高新技术产业开发区湖南路东首，山东博奥克生物科技有限公司新厂区内。目前，该项目的技术公司已与厦门大学进行沟通交流，需进行车间的建设及设备的购置。该项目

8、进行生产车间建设，预期建成年产20吨的β-葡聚糖酶生产线，购置β-葡聚糖酶的生产设备，包括大型发酵设备、菌体分离纯化设备、喷雾干燥设备、菌体闪蒸干燥设备、40平米冷库等。保证β-葡聚糖酶的规模化生产。④其它应考核的指标：通过本项目的建设，培养造就一批具有高科技水