液相色谱仪操作规程lc-20a

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1、液相色谱分析仪（LC-20A）一、开机前的准备工作1、流动相的制备：用双重纯水蒸憾器制取双蒸水于超声脱气机脱气后冷至室温后备用（流动相应每天制备使用）2、钙柱应正确连接，注意柱子的连接方向。二、仪器操作步骤2、泵头的冲洗：打开泵控制电源，将排液阀逆时针转180■使有字母的一端向上，按“Purge"键开始大流速冲洗管路（赶去流路中的气泡或由于使用缓冲液作流动相后的结晶），3分钟后,大流量冲洗自动结束，将排液阀顺时针转到原位置。3、再打开柱箱、检测器电源，双击“LCsolution”进入工作站。4、仪器与工作站连机：点^instrumenton/

2、off”键，仪器上的"oven”及"pump”灯亮，己经连接。5、设置柱箱温度为80°C,检测池温度40°C,柱子流速为0.2ml/min,点“download”将设置的方法参数下载到仪器。6、方法下载到仪器到，仪器显示“waitoven"柱箱开始升温。7、仪器显示“ready”后，点“RfLOW”图标冲洗参比池20-30分钟。8、再点“RfLOW”图标冲洗样品池20-30分钟。9、点“Balance"图标进行基线平衡，平衡时间可以持续20-30分钟，也可每隔10分钟点一次重复2-3次，基线稳定后将流速以0.1-0.2ml/min的速率调至0

3、.6ml/min10、点“Zeros”图标将基线调零，稳定后即可进样。11、分析完成后，将柱箱温度设为40°C并下载到仪器，将流速以0.1-0.2ml/min的速率调至0.2ml/min,以低流速冲洗柱子30-60分钟。（流速降下来后，可以点"instrumenton/off,>将仪器与操作系统断开，但在柱温没降下来前一定不能关泵，系统断开后可按仪器操作面板上的“pump”键将泵打开。此时可以将检测器、柱箱电源关闭。柱子冲洗完成后，一定要先按“pump”将泵关闭后再关闭电源）12、打印色谱分析报告。计算分析结果。将结果存盘后退出LCsolut

4、ion系统。三、试样的制备用双蒸水将待测样品稀释至1%--2%浓度，用0.45um水相滤膜过滤备用。四、维护与保养钙柱：1使用压力为小于4Mpa,平时使用时用2lpao先升温再降压。不用排液阀时，应关闭。2在80°C时分离效果最好，使用过程中流速要逐步加（每增加流速要在压力稳定后再增加），频率0.1-0.2ml/mino3必须待色谱柱温度降至室温后方可停止流动相的输送。4钙柱只能使用纯水作流动相，不用时用螺母封闭两端后低温保存防止水温升高染菌污染柱子。吸滤头：不锈钢烧结4-5um,过滤作用，此滤头要长吋间浸入流动相中，防止气泡进入泵后入柱子

5、。易堵塞表现为管路中有气泡生成（1个月左右），D泵压力波动大于2个（用5%稀硝酸超声波清洗15分钟，再用高纯水清洗15分钟）泵头：单向阀，两个并联泵交替工作以抵销脉冲，最大使用流速5ml/mino泵头冲洗：打开泵开关，旋转180度转动排液阀，按purge键，大流量冲洗泵头（赶走气泡、冲洗易结晶的流动相）3分钟后会自动停止，也可以按purge键手动停止，关闭排液阀。注意事项：1、大流量清洗时排液阀一定要转到位，有字母一侧向上。2、吸滤头要长时间浸入水中3、管道过滤器为4-5um,易堵。（清洗：用甲醇、异丙醇、5-10%体积比稀硝酸浸泡后再超声1

6、0-15分钟）对于1ml/min甲醇压力为小于0.5Mpa是正常的。红宝石：若有结晶状盐或纤维膜易引起压力波动（±0.3Mpa的波动是止常的）解决措施：1、用稀硝酸作为流动相冲洗。2、直接用60-70°C热水做流动相拧开2#口，接烧杯1-2小时。柱箱手相进样阀一般情况下至少可以转动4万次，若出现进样品渗液体、排液晶渗水则进样阀坏。每次更换柱子时都要查看压力情况。色谱柱的损坏情况：1、填料塌陷（进口端2-3cm）2、柱子两头过滤片易堵，引起压力升高,可以柱子反冲解决示差折光检测器示差折光检测器是根据不同物质具有不同折射率来进行组分检测的。凡是具

7、有与流动相折射率不同的组分，均可以使用这种检测器。如果流动相选择适当，可以检测所有的样品组分。示差折光检测器分为反射式和折射式两种。反射式示差折光检测器是根据下述原理制成的：光在两种不同物质界面的反射百分率与入射角和两种物质的折射率成正比。如果入射角固定，光线反射百分率仅与这两种物质的沂射率成正比。光通过仅有流动相的参比池时，由于流动相组成不变，故其折射率是固定的；光通过工作池时，由于存在待测组分而使折射串改变，从而引起光强度的变化，测量光强度的变化，即可测出该组分浓度的变化。偏转式示差折光检测器是根据下述原理：当一束光透过折射率不同的两种物

8、质时，此光束会发生一定程度的偏转，其偏转程度正比于两物质折射率Z差。示差折光检测器的优点是通用性强，操作简便；缺点是灵敏度低，最小检出限约为io(-7)g/ml,不