森林培育学实验之二(教案)

《森林培育学实验之二(教案)》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、实验二花粉的生命力测定一、实验目的：掌握用间接法测定花粉牛命力的方法，了解其原理。二、实验仪器及药品：烧杯、载玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、标签、玻璃铅笔、显微镜、测微尺、培养皿、蔗糖、琼脂、联苯胺、a—蔡酚、碳酸钠、30%过氧化氮等三、实验材料：油茶、茶叶、枇杷等树种以及各种花卉的新鲜花粉；杉木、马尾松等树种的贮藏花粉。四、实验说明：在使用经贮藏或外地来的花粉时，为保证朵交工作的成功，应预先进行花粉生命力的测定,如花粉的生命力已丧火或只冇极弱的生命力时（发芽率在5%），就不能用于杂交，否则必遭失败，花粉生命力的测定是杂交

2、工作中的重要一环。测定花粉牛命力的方法可分为总接法和间接法二类，前者是指把花粉总接受在同种植物的雌蕊上，以后观察果实发育情况或通过解剖，检査花粉的发芽情况，以确定花粉牛命力，后者乂有两种方法，即培养基法和染色法，本实验就是用染色法。五、实验步骤：（一）发芽法（培养基法）把花粉播种在特定的培养基上，置于适当的温湿条件下，使Z发芽，以鉴定花粉生命力，常用的培养棊是由蔗糖、琼脂和蒸他水配制而成，不同的树种花粉，对糖浓度要求不同，培养基的pH值一般调整到6-5.2Z初是，如果在培养基上加入少虽的硼酸和维生素B1,更利于花粉发芽。

3、1、固体培养基的配制在100ml蒸馅水中，加入1-2g琼脂，置烧杯中，隔水加热，煮开，使琼脂溶解（加热过程中用培养皿盖在烧杯上，以防水分蒸发丧失），然后加入10-15%廉糖,溶解后即为10-15%糖浓度的蔗糖琼脂培养基。趁热及滴管吸収培养基液（或总接手玻棒）滴1-2滴于载玻片的槽内，冷却后即成固体培养基。2、播种花粉用解剖针粘取少量花粉，均匀地撒在培养基上，也可用小棉花球粘取少量花粉，用口轻轻一吹，使花粉均匀播洒在培养基上，播种花粉屋不能太多，以每一视野（10X10）中的均匀分100-200粒左右的花粉为宜，播种成I才I

4、的，或数量过多的，必须重做，否则发芽后难以计数。3、培养以播好的载玻片置于或热冇湿润吸水纸的培养皿中，盖上培养皿以保湿，放在20-25°C的恒温箱中培养24小时或更长时间（不同的花粉培养时间不一样，应隔不同的时间在显微镜下连续检查花粉发芽悄况，直至花粉发芽粒数不再增加为止，花粉发芽的标准是花粉管伸长超过花粉直径为准）01、观察在显微镜卜随机取5个视野，计数花粉总数及发芽的花粉数，填入表1,算出发芽率,然后随机测定10个花粉管的长度，算出平均长度。（二）染色法（生物化学法）染色法是借助于测定花粉的过氧化物酶的活性强弱来测定

5、花粉牛命力的方法，在活花粉内存在过氧化氢酶，它町以使II202放氧分解。其放出的活性氧使还原剂氧化。本实验川无色的联苯胺和a—蔡酚作为还原剂，它们被氧化后都表现出红色或玫魂红色，花粉中过氧化氢酶的活性大小同红色的深浅成相止关，如果花粉是死的，则这一反应不能进行，花粉保持原色。1、配制药液A、卬液的配制（1）取0.2g联苯胺溶于100ml50%的酒精中，盛于棕色瓶中，置黑暗处。（2）取0.115ga-蔡酚溶于100m150%的酒精中,盛于棕色瓶中,置黑暗处。（3）取0.23g碳酸钠溶于100ml水屮，盛于口色瓶屮。（4）以

6、上三种溶液等量混合，配成“甲液”，盛于棕色瓶屮，迸黑暗处。B、乙液的配制：将30%过氧化氢临川前稀释至0.3%即为乙液。2、制片取少量花粉放在悬滴载玻片的点槽马尾，滴入一滴甲液，置片刻后，再滴一滴乙液，3-4分钟后观察。3、结果观察：在显微镜下观察，凡变成红色或玫瑰红色者为冇生命力花粉,不变色者为无生命力花粉,随机观察5个视野计数，冇、无生命力的花粉数，填入表2。算出冇生命力花粉的百分率。六、作业：1、汇总花粉生命力测定计算结果2、绘制花粉发芽形态图（注明放大倍数）。3、分析花粉发芽率高低的原因。4、比较两种测定方法的结

7、果，分析其原因。附表：记载：①树种②花粉采取口期③花粉采收方法④贮藏方法⑤测定日期⑥测定结果视野中花粉情况载玻片号树种培养基刺激物12345合计发芽率(%)花粉管平均长(u)发芽数/总数附表1发芽法显微镜倍数视野中花粉情况载玻片号树种12345合计有生命力花粉百分率发芽数/总数附表2染色法显微镜倍数