鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及其人工感染试验的初步研究

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2、默氏杆菌的分离鉴定及其人工感染试验的，舞？；初步研究－．．、、；凌＾苏玲冷吉－ｋ樣—？＇、哦？＇■声、■辦对＇＇＊，‘？’－二、．＞＇八：；－一指导教师姓名；江苏扬州，２２：成大荣教Ｉ受，扬州大学，５００９許＊，．？－申请学位级别；预防兽医学２：硕去学科专业名称諸或＇，论文提交日期：２０１５年６月巧：２０１５年４月论文答辩日期－、／＇一学位授予单位大学学位授予日期２０：１５年６月．：扬州：？■■．Ｔ—■

3、一二Ｖ，答辩委员会主席：郭爱珍教授，一．／ｔ：一词苗巧金謬誇金譜驗若若运：耀苏玲玲＝鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及其人工感染试验的初步硏究［＿中文摘要鸭疫里默氏杆菌（ＲｉｅｍｅｒｅｌｌａＡｎａｔｉｐｅｓｔｉｆｅｒ，ＲＡ）是严重危害世界范围内养鸭业并造成一レ巨大经济损失的种病原菌；主要感染禽类尤其是１月龄ッ内的维鸭，引起呼吸道症状、纤维素性也包炎、、肝周炎、气囊炎脑膜炎及关节炎等为主要特征的急性或慢性、败血性、高度接触性的传染病。做好ＲＡ的分离鉴定及其

4、致病机理的研究，对鸭疫里默巧巧菌病的防控具有重要意义。ＧｅｎＢａｎｋ上己ＲＡ的一根据发表的外膜蛋白（ＯｍｐＡ）基因序列设计了对特异性引物，建立了特异性ＰＣ民快速检测ＲＡ的方法。该引物无法对禽多杀性己氏杆菌、禽沙口氏茜、？禽大肠杆菌进行扩増，证明了建立的ＰＣＲ检测方法的特异性。采集２０１３年４月２０１４年３、月份扬州及周边地区鸭场的疑似ＲＡ感染病解（也、肝脏）３５例，并划线接种于ＴＳＡ平板，进行初步分离纯化。对疑似菌落进斤ＰＣＲ鉴定，结果获得了２０株ＲＡ分离株。选取１

5、６种抗生素药物对２０株ＲＡ进行纸片法药物敏感性试验，结果显示分离株对头抱类药￣物及脈拉西林的高度敏感率高达％％１〇〇％，对链霉素、妥布霉素、卡那霉素的耐药性高￣达９０％１００％，说明本地区的ＲＡ对头拖类药物及呢拉西林敏感，可用于指导用药。选取血清型为Ｉ型的ＲＡ菌株，寇氏改良法测得该菌株通过腹腔注射的途径感染１４７日龄维鸭的半数致死量（ＬＤ５０）为２．於１０ＣＦＵ。１个ＬＤ５０的剂量进行人工感染錐鸭一、试验，从而为进步探巧錐鸭感染ＲＡ后的免疫器官指数血清生化指标、炎症因子的动

6、态变化规律及ＲＡ在錐鸭体内的增殖规律提供了材料。通过对ＲＡ人工感染维鸭的免疫器官的监测，发现脾脏指数随着病程发展而上升，而法氏囊指数和胸腺指数均下降；恢复期各免疫器官指数均逐渐趋于正常。通过全自动生化分析仪对血清进行生化指标检测，发现錐鸭在感染ＲＡ后，谷丙转氨酶（ＡＬＴ）、谷草转氨？６０ｈ与４８？酶（ＡＳＴ）的含量呈现先降低后升高的趋势，ＡＬＴ与ＡＳＴ的含量分别在４８ｈｈ７２ｈ时显著或极显著低于对照组（Ｐ＜〇．〇５或Ｐ＜０．０１），在７ｄ时都显著高于对照组（Ｐ＜０．

7、０５）；总蛋白（ＴＰ）、球蛋白（ＧＬＯ）的含量呈现先升高后降低的趋势，ＴＰ的含量在４８ｈ后显著＜０＜？８４ｈ＜高于对照组（Ｐ．０５或？０．０〇，ＧＬＯ的含量在４８ｈ时显著高于对照组（Ｐ０．０５或ＰＯ．Ｏｌ）（ＧＧＴ）、白蛋白（ＡＬＢ）的含量在发病初期及死亡高峰期无明；谷氨醜氨转移酶显变化（Ｐ＞０．０５），仅在感染后期显著高于对照组（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。通过建立ＳＹＢ民ＧｒｅｅｎｍＲＮＡ的实时巧光定量ＰＣＲ的方法对脾脏中的炎症因子表达量进行了相对定量检测，结－

8、－－ｉ－－－果显示：维鸭感染ＲＡ后，正ｐ、正２、正６、正８、比１０、ＩＦＮＹ的ｍＲＮＡ的表这量显－＜￣著升高（Ｐ〇．〇５或ＰＯ．Ｏｌ），并于４８ｈ６０ｈ达到高峰；ＴＮＦａ基因的ｍＲＮＡ表这量在感扬州大学硕±学位论文１２ｈ￣７２ｈ期间相较对照组均有显著性升高染后（Ｐ＜０．０５），但此期间含量变化不大，感染？８４ｈ７ｄ时表达量虽－略高于对照组，但无统计学意义（Ｐ＞０．０５）；ＴＧＦｐｉ基因的ｍＲＮＡ表？达量在发病初期及死亡高峰期无明显变化，在７２ｈ８４ｈ显著高于对照组（