pirh2、p53在不同转移潜能乳腺癌细胞系中的表达及意义

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1、硕士学位论文Pirh2、p53在不同转移潜能乳腺癌细胞系中的表达及意义学科专业外科学学位类型科学学位  □专业学位研究生姓名肖蔷导师姓名、职称张超杰教授论文编号湖南师范大学学位评定委员会办公室二〇一五年五月分类号R737.9密级公开学校代码10542学号201202201521Pirh2、p53在不同转移潜能乳腺癌细胞系中的表达及意义TheExpressionandSignificanceofPirh2andp53inBreastCancerCellLineswithDifferentMetastaticPotentiality研究生姓名肖蔷指导教师姓

2、名、职称张超杰教授学科专业外科学研究方向乳腺甲状腺疾病湖南师范大学学位评定委员会办公室二〇一五年五月湖南师范大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贾献的个人和集体，均己在文中明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。Ｊ＾学位论文作者签名：月曰湖南师范大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，研究生

3、在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属湖南师范大学。同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权湖南师范大学可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｌ乂采用影巧、缩巧或担描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于１、保密□，在年解密后适用本授权书。２、不保密凸＾＂＂（请在ｋ乂上相应方框内打Ｖ）Ｗ＾作者签葦：曰期每月曰蠢名日月日。Ｊ摘要Pirh2是最近发现的泛素连接酶E3家族的新成员，具有内在“泛素化”活性的RING-H2结构域；p53是

4、迄今发现与人类恶性肿瘤相关性最高的一种抑癌基因。已有研究表明，Pirh2能够促进p53泛素化，导致其降解，从而参与癌症进展。而癌症的发展、转移过程与癌细胞的侵袭转移能力密切相关。【目的】本实验旨在探讨Pirh2、p53在不同转移潜能乳腺癌细胞系中的表达及意义，并以正常乳腺上皮细胞系作为对照，以期证明Pirh2、p53与乳腺癌细胞侵袭转移能力的相关性，为乳腺癌的诊治过程寻找新的分子机制及治疗靶点提供初步理论依据。【方法】传代培养正常乳腺上皮细胞系MCF-10A、低转移潜能乳腺癌细胞系MCF-7、中转移潜能乳腺癌细胞系MDA-MB-231、高转移潜能乳腺癌细

5、胞系MDA-MB-435s；应用实时荧光定量PCR（qPCR）及蛋白质免疫印迹法（Westernblot）方法分别检测Pirh2、p53mRNA及蛋白在正常乳腺上皮细胞系及不同转移潜能的乳腺癌细胞系中的表达情况。【结果】1.Pirh2、p53在正常乳腺上皮细胞系MCF-10A及低转移潜能乳腺癌细胞系MCF-7、中转移潜能乳腺癌细胞系MDA-MB-231、高转移潜I能乳腺癌细胞系MDA-MB-435s中均有表达。2.Pirh2在乳腺癌细胞系中的表达高于正常乳腺上皮细胞系，差异有统计学意义(P<0.05)，p53在乳腺癌细胞系中的表达低于正常乳腺上皮细胞系，

6、差异有统计学意义(P<0.05)。3.随着乳腺癌细胞转移潜能的升高，Pirh2的表达水平呈上升趋势，组间两两比较，差异有统计学意义（P<0.05)；p53的表达水平呈下降趋势，组间两两比较，差异有统计学意义（P<0.05)。4.Pirh2、p53二者的表达水平变化呈显著负相关（rmRNA=-0.904，PmRNA<0.01；r蛋白=-0.953，P蛋白<0.01)。【结论】1.Pirh2、p53的表达与乳腺癌细胞侵袭转移能力相关，Pirh2在乳腺癌细胞系中高表达，p53在乳腺癌细胞系中低表达，并且随着乳腺癌细胞转移潜能的增高，Pirh2表达水平上调、p5

7、3表达水平下降。2.Pirh2、p53的表达变化水平呈显著负相关，提示在乳腺癌细胞中可能存在Pirh2/p53信号通路，并且Pirh2负性调控p53。【关键词】乳腺癌细胞系；Pirh2、p53；实时荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹法IIPirh2、p53在乳腺癌中的表达及意义ABSTRACTPirh2isthenewmemberofE3ubiquitinligasefamily,hasintrinsic“Ubiquitylation”activeRING-H2structuredomain;p53isfoundthatthehighestcorrelati

8、onwithhumanmalignanttumorsuppressorgenes