施加畜禽粪肥对蔬菜中抗生素抗性内生细菌的影响

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1、单位代码10476学号1204180312分类号Q939.9^if$硕士学位论文施加畜禽粪肥对蔬菜中抗生素抗性内生细菌的影响学科、专业：微生物研究方向：环境微生物申请学位类别：理学硕士申请人：郭玉晖指导教师：杨清香教授二〇一五年五月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得河南师范大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。签名：崎

2、-日期x.rs关于论文使用授权的说明本人完全了解河南师范大学有关保留、使用学位论文的规定，即：有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权河南师范大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）作者签名:每孓$导师签名:勒IR期：KINFLUENCEOFMANUREAPPLICATIONONANTIBIOTICRESISTANCEENDOPHYTICBACTERIAINVEGETABLESADissertationSubmi

3、ttedtotheGraduateSchoolofHenanNormalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceByGuoYuhuiSupervisor:Prof.YangQingxiangMay,2015摘要畜禽粪便是抗生素抗性细菌的一个重要储存库。粪便在农业施肥中的应用往往造成农田土壤中抗性细菌的污染。但是，粪便施肥过程中，对于抗性细菌能否通过粪便-土壤-蔬菜途径发生转移的问题，人们还没有明确的结论。本研究选取常见蔬菜上海青和芹菜为研究对象，探讨了施

4、加畜禽粪肥对不同蔬菜根、茎、叶中抗生素抗性内生细菌丰度及多样性的影响。主要研究结果总结如下：1.大田蔬菜中抗生素抗性内生细菌的调研。挑选河南省新乡市蔬菜种植基地施加粪肥和未施粪肥的上海青和芹菜样品，检测了其中抗生素抗性内生细菌的分布和丰度。结果显示，除上海青的叶之外，所有蔬菜样品中均检测到了抗阿莫西林、抗头孢氨苄、抗四环素的内生细菌，丰度范围在1.33×10cfu·g-1~3.44×104cfu·g-1，但是，施肥蔬菜中抗性内生细菌的丰度比未施肥蔬菜高1~2个数量级。其中，施肥上海青中抗阿莫西林、头孢氨苄、四环素的内生细菌数最高可达未施肥蔬菜的2.89倍、3.61

5、倍和10.61倍；施肥芹菜中该数值最高可达未施肥蔬菜的9.16倍、19.13倍和10.65倍。这些结果说明，施用畜禽粪肥能引起蔬菜中抗生素抗性内生细菌数量的显著增加。进一步研究发现，两种蔬菜中β-内酰胺类抗生素抗性的内生细菌比例最高，芹菜中为65.80%，上海青中达到了78.82%。16SrRNA基因多样性分析结果显示，大田种植的上海青和芹菜中分离到的多重抗生素抗性内生细菌主要集中在假单胞菌属（Pseudomonassp.）和寡养单胞菌属（Stenotrophomonassp.）。尤其值得关注的是，上海青中分离到了具有多重抗生素抗性的人类条件致病菌——恶臭假单胞菌

6、（Pseudomonasputida）和嗜麦芽寡养单胞菌（Stenotrophomonasmaltophilia）。2.施加粪肥对土壤及上海青中抗生素抗性细菌丰度的影响。采用盆栽实验研究了不同施肥处理组（施加鸡堆粪组、施加商品有机肥组、施加多重抗生素抗性细菌组、未施肥组）中蔬菜植株、种植前后土壤中抗生素抗性细菌的丰度变化。结果发现，与未施肥组相比，施加鸡粪或商业有机肥均明显提高上海青和种植土壤中抗生素抗性细菌的丰度。其中，施加鸡粪的上海青中抗头孢氨苄、抗四环素、抗环丙沙星的内生细菌数分别是未施肥组的5.35倍、3.93倍和1.25倍，加粪土壤中上述药物的抗性菌数分

7、别是未施肥土壤的1.65倍、4.2倍和1.44倍，且加粪土壤中同时对上述I三种药物具有抗性的多重抗性细菌数量是未施肥土壤的4.35倍；施加商业有机肥的上海青中抗头孢氨苄、抗四环素、抗环丙沙星的内生细菌数分别是未施肥组的3.89倍、2.17倍和1.85倍，加肥土壤中上述抗性细菌数分别是未施肥组的1.1倍、1.58倍、1.6倍，同时抗三种药物的多重抗性细菌数是未施肥土壤的2.7倍。这些结果表明，施肥处理能明显增加蔬菜及土壤中抗生素抗性细菌的数量，且施加鸡粪比商业有机肥更易促使土壤和蔬菜中抗性细菌增加。3.施加粪肥对土壤和上海青中多重抗生素抗性细菌群落结构的影响。从盆栽

8、实验的土壤