子房注射法转化金钗石斛初步研究

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1、硕士学位论文丨子房注射法转化金钗石斛初步研究作者姓名3邓莹学科专业园林植物与观赏园艺指导教师段俊研究员乔爱民教授所在学院园艺园林学脘论文提交日期2015年4月学位论文原创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。日期:>〇江’日期：学位论文版权使用授权书本人完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即:学校有权保

2、留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意学校将本人的学位论文提交清华大学中国学术期刊（光盘版）电子杂志社全文出版和编入CNKI《中国知识资源总库》，传播学位论文的全部或部分内容。（保密的论文在解密后应遵守此规定）本学位论文属于：□保密，在_____年解密后适用本授权书。ef不保密,同意在校园网上发布，供校内师生和与学校有共享协议的单位浏览。(请在以上相应方框内打“v”）ThePreliminaryStudiesonGeneticTransformati

3、onofDendrobiumnobileLindl.viaOvaryInjectionADissertationSubmittedfortheDegreeofMasterCandidate：DengYingSupervisor：Prof.DuanJunProf.QiaoAiminZhongkaiUniversityofAgricultureandEngineeringGuangzhou,China分类号：S681学校代码：11347学号：20122090706010仲恺农业工程学院硕士学位论文子房注射法转化金钗石斛初

4、步研究作者姓名：邓莹指导教师姓名、职称：段俊研究员；乔爱民教授学科专业名称：园林植物与观赏园艺研究方向：园林植物生物技术论文提交日期：2015年4月27日论文答辩日期：2015年5月28日学位授予单位：仲恺农业工程学院学位授予日期：年月日答辩委员会成员：主席：蒋跃明委员：曾宋君马国华张明永吴坤林摘要金钗石斛(DendrobiumnobileLindl.)是兰科石斛属植物，具有重要的观赏和药用价值，在市场上十分畅销，同时还是许多观赏石斛的育种亲本。但从其试管苗移栽至开花的时间较长，为了缩短金钗石斛的幼年期并使其提早开花

5、，本实验采用子房注射法进行了将调控植物开花的FT基因转入其中的遗传转化研究。主要研究结果如下：1.为了选择最适的子房注射期，对金钗石斛胚囊发育过程进行了研究。通过人工授粉实验，确定异株异交的授粉座果率最高，达到了24.57%，高于自交和同株异交。通过石蜡切片和半薄切片技术观察发现，授粉后30d左右孢原细胞分化；35d左右分化成大孢子母细胞，且内外珠被开始发育；43d左右大孢子母细胞开始第一次减数分裂，形成二分体；45d左右第二次减数分裂形成四分体；48d左右第一次有丝分裂形成二核胚囊。2.利用子房注射法在授粉后不同时

6、期将外源基因转入金钗石斛子房内部，在授粉后48d~60d注射外源基因，其座果率保持不变，均为77.78%；金钗石斛在授粉后50d注射外源基因，对种子的活力影响最大，TTC染色率最低；金钗石斛在授粉后50d~60d注射外源基因，其种子萌发率较高，与未注射处理的种子萌发率相差不大。3.随机选取各处理种子用β-葡萄糖醛酸酶基因（GUS）化学染色液进行转基因检测，发现在授粉后46d和50d注射外源基因，种子GUS染色率高于其他处理；将各处理原球茎依次通过20µg/ml→40µg/ml→20µg/ml的3轮潮霉素筛选，对存活下

7、来的203株幼苗进行GUS染色初步检测发现金钗石斛在授粉后注射外源基因所得幼苗的GUS最高的处理为48d，染色率为26.56%，其次是授粉后55d处理；通过PCR分子检测，金钗石斛在授粉后48d~60d注射外源基因，其幼苗GUS基因和HPT基因的转化率较高，均达到30%以上，其中授粉后55d处理的转化率最高，为36.4%；FT基因在所有处理中转化率为0。金钗石斛子房注射法的最佳注射时间是授粉后55d。关键词：金钗石斛；胚囊发育；子房注射法；FT(floweringlocusT)基因IAbstractDendrobiu

8、mnobileLindl.,belongingtoOrchidaceae,hasimportantornamentalandmedicalvalue,aswellascruciallycommercialvalueinthemarket.Breedersalsousethemtocultivatenewvarieties.Inordertosh