三疣梭子蟹(portunus trituberculatus)在氨氮胁迫下氨氮代谢终产物排出途径的研究

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1、鑛相义々ＯＣＨＡＮＵＮＩＶＨＲＳＩＯＫＣＨＩＮＡＩＹ硕壬学位论文ＭＡＳＴＥ民ＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮｉ？Ｈ巧梭子蟹（化／ｔｔ／ｎｕｓｔｎ化ｊｂｅｒｏｚ／ｏｔｗ）在氨氛ｊ论文题目：胁迫下気巧代谢终产物桃出途径的研究ＩＳｔｕｄｙｏｎｎｉｔｒｏｇｅｎｏｕｓｗａｓｔｅｓｅｘｃｒｅｔｉｏｎｏｆｔｈｅＩ．ｓｗｉｍｍｉｎｇｃ口ｂＰｏ＂ｕｎｗｔ／７ｆｔ／／？ｅｒａ／／ｏ化５英文题目：ｅｘｓｅｄｔｏｐｏａｍｍｏｎｉａ作者：堅指导教师：潘鲁青教

2、授学位类别：全日制学术学位专业名称：７］＜生生物学研究方向：水生动物环境生理学？’…。如１一．．．．．．．…二…一ｒ请ＨｉＵ【—．＇＇—、气—Ｓ．一Ｃ１奋ｎ；说站接读：狂对接主谨此文献给我的父母、导师和所有关也帮助过我的朋友们！任琴Ｈ巧梭子蟹在氨氮胁迫下氨氮代谢终产物排出途径的研究＇巧学位论文完成ｎ货：］六兰指导教师签字＝答辩委员会成巧签字：可疋、今—＃１独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及

3、取得的研究成果，除了文中特别加标注和致谢的地方外，论文中不包含其。据我所知他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得或其他教育机构的学位或证书使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。￣？学位论文作者签名；曰：签字日期＞＾年＞＾学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留，、使用学位论文的规定并同意Ｗ下事项：１、学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。２、学校可Ｗ将学位论文

4、的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印＂、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学中＂Ｋ国学术期刊（光盘版）电子杂志社用于出版和编入ＣＮＩ《中国知识资源总库》，授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签＾：１＾（令＾＾＇＇＾＜２签字曰期；户１年＾月苗曰签字曰期：＞１年＾１月曰＾＞？Ｈ巧梭子蟹（／０／化／ｌ？パ／７Ｖ？Ａｅ／ｒ？知／ｗ）在氨氮胁迫下氨氮代谢终产物排出

5、途径的研究摘要，在水产养殖体系中，氨氮浓度会随时间的延长而快速增加现己成为蟹类健康养殖中一个主要的生理挑战ＤＧＥ技术构建和分析了Ｈ巧梭子。本文通过运用蟹在氨氮胁迫下的魄基因表达谱，检测了氨氮代谢终产物排出相关的通道蛋白基因表达水平、尿素和尿酸合成相关的酶基因表达水平，测定了各组织中氨氮代谢终产物含量的变化，深入探讨了三统梭子蟹在氨氮胁迫下的生理适应机制、解毒代谢机制和代谢产物的排出机制。本论文主要内容包括个方面：１应用ＤＧＥ技术构建与分析Ｓ巧梭子蟹在氨氮胁迫下魄基因表挂谱本实验运用数字基

6、因表达谱（ＤＧＥ）技术构建了兰巧梭子蟹在５ｍｇ／ＬＮＨ４Ｃｌ胁迫４８ｈ下的鲍基因表达谱。共产生５８乃６条ｕｎｉｇｅｎｅｓ，平均长度为６８９ｂｐ。差异基因功能分类表明在氨氮胁迫下被显著调节的生理过程主要有氨基酸代谢、核昔酸代谢、线粒体膜电位调节、活性氧代谢、抗氧化及免疫响应。本文选择了分别对与抗氧化系统、线粒体电子传递、蛋白质消化与吸收、免疫系统相关的７个基因进行了实时定量ＰＣＲ验证。本研究结果为更好的理解兰巧梭子蟹在氨氮胁迫下分子响应机制提供了极具价值的基因信息。２Ｈ巧梭子蟹在氨氮胁迫下氨排出

7、途径的研究本实验将Ｈ巧梭子蟹曝露于不同浓度（Ｏｍｇ／Ｌ、Ｉｍｇ／Ｌ、５ｍｇ／Ｌ）的ＮＨ４ＣＩ溶液中，研究了氨氮胁迫对Ｈ统梭子蟹血淋己氨含量的影响；鲍组织中＋＋＋Ｎａ－－／ＫＡＴＰ酶（ａ亚单位）（ＮＫＡ）、ＨＡＴＰ酿（亚单位Ａ）活力Ｒｈ：皱组织中＋＋＋＋＋＋转氨蛋白（灿）、Ｋ通道（ＫＣｈａｎｎｅｌ）、Ｎａ／Ｋ／２ＣＩ共转运体（ＮＫＣＣ）、Ｎａ／Ｈ交换体（ＮＨＥ）和与囊泡相关的膜蛋白（ＶＡＭＰ）基因表这水平的影响，同时观察了皱组织的超微结构。结果表明，氨氮胁迫对Ｈ巧梭子蟹血淋己氨含量、鲍组＋织中Ｎ

8、ＫＡ与Ｈ－ＡＴＰ酶活力Ｗ及各转运蛋白通道基因表达水平有显著性影响。血淋己氨含量在氨氮胁迫下均显著增加，其中１ｍｇ／ＬＮＨ４幻处理组中血氨含量，并于２４ｈ后达到稳定状态，５ｍｇ／ＬＮ逐渐增加＆Ｃ］处理组中血氨含量在实验期＋４ｈ－间内呈峰值变化，于２这到最大值。鲍组织中ＮＫＡ与ＨＡＴＰ酶活力